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背景:腹膜透析(PD)是一种安全有效、简单便捷、居家治疗的肾脏替代治疗方式。腹膜纤维化是腹膜衰竭的主要原因,但目前无明确有效的治疗手段。NF-κB抑制剂小白菊内酯(PTL)是从艾菊中提取的倍半萜烯内酯化合物,可以通过抑制炎症减轻肺纤维化,但其对腹膜纤维化的作用及相关机制尚未见报道。第一章观察PTL对小鼠腹膜纤维化的抑制作用目的:体内实验探讨PTL对腹膜纤维化的作用。方法:建立小鼠腹膜纤维化模型,并随机分为:正常对照组、14天模型组、28天模型组、PTL12.5组、PTL25组、PTL50组及PTL延迟干预组。14天和28天后收集标本。马松染色检测壁层腹膜的厚度,腹膜平衡实验检测腹膜功能,Western Blot和免疫组织化学技术(IHC)检测腹膜Fibronectin、Collagen Ⅰ、E-cadherin的表达水平。结果:1、马松染色可见模型组腹膜厚度明显增加,同时伴有尿素氮和葡萄糖转运量的增加;Western blot显示与对照组相比,模型组的Fibronectin、Collagen Ⅰ的表达增加而E-cadherin的表达下降。2、与模型组相比,PTL治疗组和延迟干预组的小鼠腹膜厚度均明显减轻,尿素氮和葡萄糖转运量降低,腹膜Fibronectin、Collagen Ⅰ的表达水平降低,而E-cadherin的表达水平升高。结论:PTL能有效预防和治疗腹膜纤维化。第二章PTL抑制腹膜纤维化的机制研究目的:体内实验探讨PTL对小鼠腹膜中pSmad2/3表达水平的影响。体外实验探讨PTL对TGF-β1诱导HMrSV5细胞转分化的作用及相关机制,明确腹膜纤维化和Smad2/3的关系,并阐述p65表达水平的变化。方法:体内实验:IHC检测腹膜pSmad2/3的表达。体外实验:TGF-β1 10ng/ml刺激 HMrSV5 细胞,予 1.25、2.5 和 5μM 的 PTL 共同处理 48h、24h 和 3h,Western Blot 检测 Fibronectin、Collagen Ⅰ、E-cadherin、p65、pSmad2、Smad2、pSmad3、Smad3、pSmad1/5/9、Smad1/5/9、p-AKT、AKT、p-ERK、ERK、p-p38 和 p38的表达水平。细胞爬片免疫荧光检测Smad2和Smad3在细胞浆和细胞核的分布。此外,TGF-β1 10ng/ml刺激HMrSV5细胞,1、3μM的Smad3抑制剂SIS3共同处理 1h 和 48h,Western Blot 检测 pSmad3、Smad3、Fibronectin、Collagen Ⅰ、E-cadherin的表达水平。结果:1、与模型组相比,PTL治疗组和延迟干预组腹膜的pSmad2/3表达下降;2、Western Blot结果示三种浓度PTL均能降低TGF-β1诱导HMrSV5细胞产生的上皮间质转化(EMT),表现为Fibronectin、Collagen Ⅰ的表达降低和E-cadherin的表达升高,PTL 5μM组最明显;3、PTL选择性抑制Smad2/3磷酸化,但不影响Smad1/5/9、p38、ERK或AKT磷酸化;4、PTL抑制Smad2/3入核;5、SIS3 抑制 TGF-β1 诱导 Smad3 的磷酸化,降低 Fibronectin、Collagen Ⅰ的表达,而升高E-cadherin的表达;6、PTL抑制p65核移位。结论:PTL可能通过选择性抑制TGF-β/Smad2/3信号通路减轻TGF-β1诱导HMrSV5细胞产生的EMT。PD相关性腹膜纤维化可直接由Smad2/3的激活引起。