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研究目的:胆管癌是起源于胆管上皮的恶性肿瘤。由于缺乏敏感性和特异性均很高的早期诊断胆管癌的方法,胆管癌诊断时多为晚期,手术切除率低、预后差。如何早期诊断胆管癌,提高胆管癌患者生存率是当前研究的重点。本研究以胆管脱落细胞为对象,研究其形态学特点、体外培养情况以及胆管癌相关基因(CDX2、MUC1、MUC2、MUC3、MUC5AC、TFF1)的表达情况,了解胆管恶性肿瘤的生物学行为,为在细胞和分子生物学水平研究胆管恶性肿瘤的发生提供确切的检测方法,寻找胆管癌早期诊断的线索。研究方法:1、收集我院梗阻性黄疸住院病人胆汁,运用不同的离心方法采集胆汁中脱落细胞,进行瑞-姬和Hoechst33258染色,显微镜下观察。2、体外培养胆汁中脱落细胞,探讨胆管癌细胞体外培养方法。3、在胆管脱落细胞中提取总RNA,应用半定量RT-PCR方法检测胆管癌相关基因CDX2、MUC1、MUC2、MUC3、MUC5AC、TFF1 mRNA在胆管癌和胆管结石病变中的表达情况,在基因水平探讨胆管癌发病机制。研究结果:1、应用过滤和梯度离心法在胆管良、恶性病变患者离体6小时的胆汁中可采集到大量的胆管脱落细胞,沉淀后固定染色发现,所采集到的胆管脱落细胞保持原有细胞形态,良性或恶性病变胆管脱落细胞具有明显的形态学特征。2、应用普通培养方法,胆管癌胆汁中脱落细胞可在体外培养生长数天至一个月。长期体外培养的胆管癌细胞能保持肿瘤细胞特征。3、CDX2、MUC1、MUC2 mRNA仅在胆管癌患者胆管脱落细胞中表达,而在胆管结石患者胆管脱落细胞中相应mRNA表达很少发现,两者表达程度差异有显著性(P＜0.01)。MUC5AC和TFF1 mRNA在胆管癌和胆管结石患者胆汁脱落细胞中均有表达,两者在胆管癌脱落细胞中表达水平高于胆管结石脱落细胞,差异有显著性(P＜0.05)。MUC3 mRNA仅在胆管结石脱落细胞中有表达。结论:1、经过改进样本采集及染色方法,提高了采集胆汁脱落细胞数量,增强了检测的敏感性和稳定性。无论良性或恶性病变,胆管梗阻后胆汁引流中均存在较大数量脱落细胞,其形态特征具有病变性质代表性,可以作为临床诊断依据,还可进一步认识胆管病变过程中胆管上皮细胞形态,为在细胞和分子生物学水平研究胆管恶性肿瘤发生提供新的检测方法。2、胆管癌胆汁中胆管脱落细胞经分离后可在体外进行培养,部分细胞经长期培养能保持胆管癌恶性肿瘤特征,胆管癌细胞离体培养为深入研究胆管癌发生发展特性提供了新的手段。3、主要在胃肠道黏膜上皮细胞表达的CDX2、MUC1、MUC2、MUC5AC和TFF1 mRNA在胆管癌胆汁脱落细胞中有异位表达,与胆管结石胆管脱落细胞相比,上述基因表达程度在胆管癌胆汁脱落细胞中明显升高。提示这些基因在胆管细胞中异常表达可能与胆管癌发病相关。