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目的:多发性骨髓瘤（Multiple myeloma,MM）是浆细胞恶性肿瘤,克隆性浆细胞分泌单克隆免疫球蛋白及其片段,两者在体内的累积造成机体一系列相关症状和体征。目前,多发性骨髓瘤已经发展成为继非霍奇金淋巴瘤之后的血液系统第二大恶性肿瘤,占血液系统恶性肿瘤的10%。芬戈莫德（FTY720）是一种新型免疫抑制剂,因其免疫抑制剂的作用,已经在2010年批准为治疗多发性硬化的一线药物。后续研究发现FTY720除了免疫抑制作用外,还具有广泛的抗肿瘤作用,在很多肿瘤细胞中,包括多发性骨髓瘤,FTY720可使其增殖受抑制。我们既往发现FTY720可引起多发性骨髓瘤细胞发生凋亡和自噬性细胞死亡。但是,FTY720诱导自噬的机制尚需进一步研究,而且FTY720引起的MM细胞死亡率不能仅仅以现有的死亡方式凋亡和自噬来解释,我们推测还存在其它的细胞死亡方式。铁死亡是新提出的一种细胞死亡形式,很多研究报道其介导肿瘤的增殖,迁移,转移,耐药等过程。很多研究发现,铁死亡发生时常伴肿瘤细胞的增殖受抑制,因此有望成为肿瘤治疗的新方向。有报道显示,铁死亡与自噬密切相关,自噬发生时可伴铁死亡的发生。本文旨在探究FTY720诱导多发性骨髓瘤细胞发生自噬的机制,同时将FTY720和铁死亡联系在一起,探究FTY720是否和铁死亡存在关联并进一步探究作用于铁死亡和自噬的机制以及铁死亡和自噬的相关关系,为FTY720的临床应用提供进一步的理论基础和借鉴意义。研究方法:本文选取25例人骨髓细胞样本以及两种多发性骨髓瘤细胞系U266和RPMI8226进行相关试验,其中含12例正常骨髓移植捐赠者样本,13例初诊多发性骨髓瘤患者样本。1、探究FTY720诱导自噬的作用机制。应用qRT-PCR检测初诊多发性骨髓瘤患者和正常骨髓移植捐赠者样本中eEF2K mRNA的表达变化;应用Western Blot检测PP2A/AMPK/eEF2K信号通路相关蛋白的表达变化;应用PP2A抑制剂和AMPK促进剂与FTY720合用处理多发性骨髓瘤细胞,CCK8检测细胞生存率的变化;应用PP2A抑制剂和AMPK促进剂与FTY720合用处理多发性骨髓瘤细胞,Western Blot检测自噬蛋白p62和LC3B的表达变化。2、探究FTY720是否诱导多发性骨髓瘤细胞发生铁死亡。FTY720处理多发性骨髓瘤细胞,应用荧光显微镜和流式细胞术检测活性氧的变化,应用荧光显微镜检测Fe2+的变化,线粒体形态的变化;应用两种铁死亡抑制剂ferrostatin-1（Fer-1）和deferoxamine mesylate（DFOM）与FTY720合用处理多发性骨髓瘤细胞,CCK8检测细胞生存率的变化;应用qRT-PCR检测初诊多发性骨髓瘤患者和正常骨髓移植捐赠者样本中GPX4和SLC7A11的表达变化;FTY720处理多发性骨髓瘤细胞系,应用qRT-PCR检测两种多发性骨髓瘤细胞中GPX4和SLC7A11的表达变化;FTY720以不同时间和不同浓度处理两种多发性骨髓瘤细胞,应用Western Blot检测GPX4和SLC7A11的表达变化。3、探究FTY720诱导的铁死亡和自噬的相互关系。应用PP2A抑制剂和AMPK促进剂与FTY720合用处理多发性骨髓瘤细胞,Western Blot检测铁死亡蛋白GPX4和SLC7A11的表达变化;应用铁死亡抑制剂和自噬抑制剂与FTY720合用处理多发性骨髓瘤细胞,Western Blot分别检测对自噬蛋白p62和LC3B的影响和对铁死亡蛋白GPX4和SLC7A11的影响。结果:1、初诊多发性骨髓瘤患者细胞中eEF2K mRNA表达与正常骨髓移植捐赠者细胞比较明显升高;FTY720处理多发性骨髓瘤细胞后,p-PP2Ac（Tyr307）,p-AMPKɑ（Thr172）and p-eEF2随浓度升高表达降低,其总蛋白无明显变化;应用PP2A抑制剂和AMPK促进剂与FTY720合用处理多发性骨髓瘤细胞,结果显示FTY720组细胞生存率低于对照组,FTY720与PP2A抑制剂合用组及与AMPK促进剂合用组细胞生存率高于FTY720组,低于对照组,单独PP2A抑制剂组生存率与对照组比较无明显变化,单独AMPK促进剂组与对照组比较生存率略升高。应用PP2A抑制剂和AMPK促进剂与FTY720合用处理多发性骨髓瘤细胞,结果显示FTY720组与对照组比较p62表达降低,LC3Ⅱ/Ⅰ表达升高,FTY720与PP2A抑制剂合用组及与AMPK促进剂合用组p62表达升高,LC3Ⅱ/Ⅰ表达降低,与FTY720组相比。2、FTY720处理多发性骨髓瘤细胞后,活性氧增加,Fe2+增加,线粒体缩小,线粒体嵴和线粒体双层膜被破坏。应用Fer-1与FTY720处理多发性骨髓瘤细胞后,FTY720组细胞生存率低于对照组,FTY720与Fer-1合用组细胞生存率高于单独FTY720组,低于对照组,单独Fer-1组生存率与对照组比较无明显变化,DFOM处理细胞后得到了相似的结果。初诊多发性骨髓瘤患者中GPX4和SLC7A11表达与正常骨髓移植捐赠者细胞比较明显身高。FTY720处理多发性骨髓瘤细胞后,GPX4和SLC7A11表达降低;FTY720以不同浓度和不同时间处理多发性骨髓瘤细胞后,GPX4和SLC7A11随浓度增加表达降低,随时间增长,表达降低。3、应用PP2A抑制剂和AMPK促进剂与FTY720合用处理多发性骨髓瘤细胞,结果显示FTY720组与对照组比较GPX4和SLC7A11表达降低,FTY720与PP2A抑制剂合用组及与AMPK促进剂GPX4和SLC7A11表达升高,与FTY720组相比。应用铁死亡抑制剂Fer-1与FTY720合用处理多发性骨髓瘤细胞,结果显示FTY720组p62表达降低,LC3Ⅱ/Ⅰ表达升高,FTY720与Fer-1合用组与单独FTY720组比较p62表达身高,LC3Ⅱ/Ⅰ表达降低。应用自噬抑制剂bafilomycin A1（Baf-A1）与FTY720合用处理多发性骨髓瘤细胞,结果显示FTY720组GPX4和SLC7A11表达降低,FTY720组与Baf-A1合用组与单独FTY720组比较,GPX4和SLC7A11表达升高。结论:1、FTY720通过PP2A/AMPK通路调节多发性骨髓瘤细胞自噬的发生。2、FTY720可诱导多发性骨髓瘤细胞发生铁死亡。3、PP2A/AMPK通路介导FTY720诱导的铁死亡,FTY720诱导的铁死亡和自噬相互促进。