【摘 要】
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【目的】前期研究发现DH基因在急性髓系白血病(AML)患者中异常高表达,为观测AML初治和缓解期患者与正常人DH蛋白表达水平差异,并比较DH蛋白表达与其ATP酶活性的关系。【方法
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【目的】前期研究发现DH基因在急性髓系白血病(AML)患者中异常高表达,为观测AML初治和缓解期患者与正常人DH蛋白表达水平差异,并比较DH蛋白表达与其ATP酶活性的关系。【方法】1、实时定量PCR(real-time Q-PCR)检测,比较15例AML患者初诊时、完全缓解(CR)后与正常人的DH mRNA表达水平;蛋白印迹法(Western Blot)检测AML患者、AML-CR患者与正常人的DH蛋白表达情况;应用ATP酶活性检测试剂盒检测48例AML、10例AML-CR与15例正常人细胞之间的ATP酶活性差异。2、应用脂质体转染法,将重组质粒pCMV-W/M-DH转入293T细胞作为野生实验组与突变实验组,以未转染的293T细胞为空白对照组,转染空pCMV质粒的细胞为阴性对照组,real-time PCR法检测各组DH基因的mRNA表达水平,western blot检测各组DH基因蛋白水平,并比较DH基因过表达转染后野生型与突变型DH蛋白的ATP酶活性的变化。【结果】1、AML患者DH mRNA高表达,化疗CR后DH mRNA表达水平明显下调(p=0.0026),而AML-CR后患者与正常人之间的DH mRNA水平无明显差异(p=0.2013);2、DH蛋白在AML患者中高表达,并且显著高于AML-CR期患者和正常人(p<0.0001);3、AML患者组ATP酶活性均值高于AML-CR组和正常人组,但差异无统计学意义(p=0.4231);4、AML患者DH基因表达量与细胞ATP酶活性正相关,但无统计学意义(r=0.17,p=0.3725);5、转染pCMV-WDH-293T细胞及pCMV-MDH-293T细胞后,成功过表达野生型及突变型DH蛋白;6、过表达野生型组细胞ATP酶活性明显高于空白对照组和阴性对照组细胞ATP酶活性(p=0.0137),但与过表达突变型组细胞ATP酶活性无统计学差异(p=0.1026)。【结论】1、AML患者CR后DH基因及其蛋白的表达水平明显下降,提示DH基因可能与白血病的发生发展相关;2、AML患者与AML-CR患者、正常人之间DH蛋白表达差异对AML细胞ATP酶活性无明显影响,同时DH基因表达水平与细胞ATP酶活性无明显相关;3、过表达野生型DH蛋白后,细胞ATP酶活性有一定程度提高,而DH基因突变可能不影响细胞ATP酶活性变化。
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