欧美杨108号遗传转化条件筛选及抗虫性测定

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a242269752
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杨树种类多、生长快、适应性强,在我国分布广泛并大面积种植,在林业生产和生态恢复中发挥着巨大的经济效益和生态功能。由于人工林面积的逐年增加和经营管理不当,长期遭受病虫的侵害,造成严重的经济和生态损失。本文以欧美杨108号(Populusnigra×Populus deltoids“108”)为受体材料,采用农杆菌介导法,在优化的转化条件下将外源抗虫基因(Bt+蜘蛛杀虫肽基因)成功导入该受体中,并对转化植株进行分子和生物测定,确定欧美杨108号转化植株的的表达效果、抗性水平,为抗虫杨树的定向培育和野外应用奠定科学基础。1.对欧美杨108号遗传转化条件优化后,确定最佳转化体系为选择欧美杨108号无菌苗叶基部置于不含卡那霉素、含200μmol/L AS的分化培养基中,预培养48h后用浓度OD600=0.1的菌液侵染10min,移入不含卡那霉素、含200μmol/L AS的分化培养基中,28℃共培养24h~48h后,取出置于温室中除菌筛选培养,最终获得抗性植株。2.以上述最佳转化条件为基础,进行了遗传转化,获得卡那霉素抗性芽5株。经过PCR检测4株呈阳性,初步表明其目的基因已转化到欧美杨108号基因组中。经过PCR-Southern印迹杂交检测,4株均呈阳性,阳性率100%,进一步证明,目的基因已整合到欧美杨108号基因组内。3.利用转化植株对舞毒蛾幼虫进行了生物测定,结果表明,2个转化植株均具有延缓幼虫发育和降低发育速率的作用,而且转化植株TP1对幼虫发育速率的影响明显大于TP2。4.转基因植株对舞毒蛾幼虫体重增长具有抑制作用,且表现出抑制作用随时间延长而增强的趋势,前期抑制作用较强,中期稍有下降,但后期又缓慢上升;TP1和TP2对幼虫体重降低率的抑制作用差异并不显著。转基因植株与舞毒蛾幼虫取食量和排粪量关系发现,转基因植株具有减少幼虫取食量和排粪量的作用。5.对转化植株进行抗虫性初步检测表明,转化植株具有明显的杀虫效果,TP1导致舞毒蛾幼虫的死亡率高于TP2
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