论文部分内容阅读
研究目的:1、分析Aurora-A在甲状腺乳头状癌中的表达情况并分析Aurora-A的表达水平与患者的临床病理之间的关系。2、揭示Aurora-A在甲状腺乳头状癌细胞系中的功能。3、体内验证Aurora-A对小鼠成瘤能力的影响。4、探究Aurora-A影响甲状腺乳头状癌进展的机制。研究方法:1、利用GTEx和TCGA归一化整合数据库为核心以及甲状腺乳头状癌患者的新鲜冰冻标本分析Aurora-A的表达。2.、利用甲状腺乳头状癌蜡块组织制作组织芯片,并且通过免疫组化检测AuroraA的表达水平,结合病人的病历资料,经统计分析探究Aurora-A的表达水平与患者的临床病理之间的关系。3、在甲状腺乳头状癌的细胞系中,稳定的敲低或者过表达Aurora-A,进行CCK8以及克隆形成实验探究Aurora-A对细胞增殖的影响,通过Transwell实验探究Aurora-A对细胞迁移的影响。4、利用Aurora-A稳定敲低的细胞系,构建小鼠皮下成瘤模型,体内验证AuroraA对小鼠成瘤能力的影响。5、通过蛋白质谱检测,找到Aurora-A潜在的靶分子,探究Aurora-A影响甲状腺乳头状癌进展的机制。实验结果:1、利用GTEx和TCGA归一化整合数据库为核心,检索到512例甲状腺乳头状癌患者和337例正常人建立数据库,比较Aurora-A在甲状腺乳头状癌组织以及正常甲状腺组织中的表达水平,结果显示Aurora-A在甲状腺癌乳头状癌中的表达高于甲状腺正常组织;同时我们提取了4组甲状腺癌乳头状癌患者的癌组织以及癌组织旁正常组织,经过Western-blot检测,发现在癌组织中Aurora-A的蛋白水平明显高于正常组织。2、选取在甲状腺乳头状癌患者185例,应用免疫组化的方法对组织芯片进行染色,检测Aurora-A的表达水平与临床病理之间的关系,结果显示,在甲状腺乳头状癌患者中,Aurora-A的表达水平存在差异,经统计分析发现,Aurora-A高表达的疾病相关存活率(disease-specific survival)低于Aurora-A低表达组,Aurora-A的高表达与年龄、淋巴结转移、T分期、TNM分期、复发相关有显著相关性,而与性别、多灶性无明显相关性。3、细胞表型实验揭示了Aurora-A在PTC中的功能:敲低Aurora-A抑制甲状腺乳头状癌细胞的增殖能力,而过表达Aurora-A能够促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖能力;而Aurora-A是否影响甲状腺乳头状癌细胞迁移的Transwell实验发现:与对照组相比,不管是TPC-1还是IHH4敲低Aurora-A细胞组穿过小室的细胞数量都明显少于对照组,具有统计学差异,提示在PTC细胞中,降表达AuroraA细胞的迁移能力减弱;而与对照组相比,不管KTC细胞过表达组还是K1细胞过表达组穿过小室的细胞数量都明显增多,而且具有统计学差异,这提示在PTC细胞中,过表达Aurora-A细胞的迁移能力增强,以上都提示,Aurora-A在PTC细胞系中,可以促进细胞的增殖和迁移。4、在TPC-1细胞中敲低Aurora-A后,细胞形成肿瘤的大小显著低于对照组,而且随着时间的推移这种趋势更明显,瘤块重量约为对照组的30%,免疫组化染色发现敲低Aurora-A之后,Ki67的阳性率降低,表明Aurora-A剂量减少显著影响体内PTC的形成。5、通过蛋白质谱检测,我们找到了m TORC2的重要亚基SIN1可能与Aurora-A存在结合,Co-IP验证两者确实存在结合,并且Aurora-A可以影响SIN1的蛋白水平从而影响m TORC2/AKT信号通路的活性。结论:1、Aurora-A在PTC患者癌组织的m RNA和蛋白表达水平都高于癌旁正常组织,并且Aurora-A的高表达与年龄、淋巴结转移、T分期、TNM分期、复发有显著相关性。2、Aurora-A可以促进PTC细胞的增殖和迁移。3、体内验证敲低Aurora-A可以抑制小鼠的成瘤能力。4、Aurora-A通过影响SIN1蛋白的稳定性从而影响影响m TORC2/AKT信号通路的活性。