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本实验采用RACE PCR技术和巢氏PCR方法分别从褶纹冠蚌和三角帆蚌中克隆到硫氧还蛋白(Trx)和葡萄糖调节蛋白78(Grp78)基因的cDNA全长序列。通过荧光定量PCR技术分析了Trx在褶纹冠蚌血细胞、肝胰腺、鳃、外套膜和肌肉组织中的表达,以及PBS刺激和金黄色葡萄球菌刺激后其在褶纹冠蚌五种组织中的表达变化。利用半定量RT-PCR分析Grp78基因在三角帆蚌的五个组织中表达,以及冷、热休克诱导后Grp78基因在三角帆蚌的五个组织中表达变化。1、CpTrx基因序列1169bp(登录号：KC209545),其中5’非编码区(UTR)长11bp,3’非编码区长840bp,含有PolyA尾和典型的腺苷酸信号序列AATAAA,开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)长度为318bp,编码105个氨基酸。预测蛋白质分子量为11.79kDa,等电点为5.38,不含有信号肽。氨基酸序列中含有1个Thioredoxin结构域(T3-K104),区域内包含一个保守的CGPC活化位点。序列同源性比较结果显示褶纹冠蚌Trx与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)和紫贻贝(Mytilus galloprovincialis)的氨基酸序列一致性分别为56%和52%。预测的Trx空间结构由5个p折叠和4个α-螺旋组成,α-螺旋包围p折叠形成紧密的球形,这一结构与人的Trx空间结构相似。(?)rx mRNA在血细胞、肝胰腺、鳃、外套膜、闭壳肌中均有表达,在鳃中表达量最高,其次是肝胰腺。金黄色葡萄球菌刺激褶纹冠蚌后,与PBS相比,各组织中的Trx表达量上升,血细胞中12h达到最高点后逐渐降低,48h最低但仍比空白对照高；肝胰脏中12h到48h一直升高到最大；鳃中12h明显升高,并达到最大值,然后开始降低直至空白对照以下；外套膜中12h和24h的表达量逐渐降低,36h的表达量升高,达到最大值,48h的表达量再次降低至空白对照以下；闭壳肌中12h明显升高,并达到最大值,24h、36h、48h的表达量明显降低并至空白对照以下。2、HcGrp78基因cDNA全长为3721bp,其中5’UTR长度为148bp,3’UTR长度为1578bp,包含1个AATAA加尾信号和一个多聚腺苷酸ploy (A)尾,开放阅读框长度为1995bp,预测编码664个氨基酸。预测HcGrp78蛋白分子量为73.27kDa,理论等电点为4.99。N端有一段长度为22个氨基酸的信号肽(Met-Gla22)。第44-51个氨基酸、第232-245个氨基酸及第369-383个氨基酸为3个HSP70家族的签名序列(Signature sequence),分别为IDLGTTYS、 VFDLGGGTFDVSLL和VVLVGGSTRIPKVQQ.含有16个丝氨酸磷酸化位点和、8个苏氨酸磷酸化位点、4个酪氨酸磷酸化位点。序列同源性比较结果显示三角帆蚌Grp78与其他物种高度保守,同源性在92%以上。HcGrp78mRNA在三角帆蚌肌肉、外套膜、鳃、肝胰腺和血细胞中均有表达。4℃冷刺激后,与正常温度20℃相比,在各组织中的表达量没有明显变化；40℃热休克诱导后,肝胰腺中的表达量显著提高,血细胞和鳃内的表达量增加也较明显,而肌肉内的表达量变化不明显。