第一部分CXCL12与CXCR4在贲门癌中的表达及相关性探讨　　目的：本研究通过检测CXCL12与CXCR4在贲门癌与癌旁正常组织中的表达差异，分析CXCL12与CXCR4的表达水平与贲门癌临床病例特征的相关性以及CXCL12与CXCR4在贲门癌中表达水平的相关性，为找寻早期诊治贲门癌提供新的依据及靶点提供理论依据。　　方法：随机收集2015年12月?2016年12月经内蒙古自治区人民医院确诊的80例配对新鲜贲门癌组织及癌旁正常组织。采用荧光定量PCR和免疫组化法检测CXCL12和CXCR4在mRNA和蛋白水平的表达情况，分析CXCL12和CXCR4的表达水平与患者临床病例参数的相关性，同时分析贲门癌中CXCL12和CXCR4的表达水平的相关性。　　结果：荧光定量PCR结果显示贲门癌组织中CXCL12的表达水平明显髙于其在癌旁正常组织中的表达水平（t=28.101，P＜0.05)；免疫组织化学结果显示贲门癌组织中CXCL12的表达水平明显髙于其在癌旁正常组织中的表达水平（x2=21.440，P＜0.05)o荧光定量PCR结果显示贲门癌组织中CXCR4的表达水平明显高于其在癌旁正常组织中的表达水平（t=3.481，P＜0.05);免疫组织化学结果显示贲门癌组织中CXCR4的表达水平明显髙于其在癌旁正常组织中的表达水平(x2=60.554, P＜0.05)。贲门癌组织中CXCL12的表达水平与患者性别(x2=0.436, F>0.05)>年龄（x2=0.845，p>0.05)无明显相关性，而与肿瘤的分化程度（x2=9.990，P＜0.05)、浸润深度（x2=8.278，P＜0.05)、淋巴结转移（x2=10.509，P＜0.05)以及TNM分期（x2=14.335，P＜0.05)相关;贲门癌组织中CXCR4的表达水平与患者性别(x2=0.224，P＞0.05)、年龄(x2=0.822，P＞0.05)无明显相关性，而与肿瘤的分化程度(x2=4.974，P＜0.05)、浸润深度（x2=6.318，P＜0.05)、淋巴结转移（x2=8.638，P＜0.05)以及TNM分期（x2=7.767，P＜0.05)相关。贲门癌组织中CXCL12的表达水平与CXCR4的表达水平呈正相关（r=0.363，P＜0.05)。　　结论：（1) CXCL12与CXCR4在人贲门癌中高表达，(2)CXCL12与CXCR4在人贲门癌中的表达呈正相关；（3) CXCL12与CXCR4可能作为早期诊治贲门癌的靶点。　　第二部分CXCL12/CXCR4通过调控PI3K/Akt/NF-KB信号通路影响贲门癌细胞增殖机制的研究　　目的：本部分研究旨在了解CXCL12/CXCR4在贲门癌发生和发展过程中的作用及其可能的调控机制，为探索新的靶向治疗策略提供实验依据。　　方法：分离和培养贲门癌原代细胞。将贲门癌细胞分为三组，即正常培养的贲门癌细胞（control组)、慢病毒转染上调CXCL12表达的贲门癌细胞（CXCL12组）以及同时转染慢病毒上调CXCL12表达和干扰CXCR4表达的贲门癌细胞（CXCL12+si-CXCR4组)。采用CCK-8法检测上述各组细胞的增殖活性；采用western blot法检测上述各组细胞中CXCR4、PI3K、p-Akt、Akt、NF-kB p65蛋白的表达。　　结果：CXCL12组的CXCR4的蛋白表达相较于control组是明显上升的(P＜0.05)，而同时转染si-CXCR4慢病毒后贲门癌细胞中CXCR4蛋白的表达水平明显低于CXCL12组，但仍高于control组（P＜0.05)。与control组相比，CXCL12组贲门癌细胞的增殖率明显增高(P＜0.05);而CXCL12+si-CXCR4组细胞的增殖率低于CXCL12组，但仍髙于control组(P＜0.05)。与control组相比，CXCL12组贲门癌细胞中PI3K、NF-kBp65蛋白的表达水平及P-Akt/Akt的比值明显上调（P＜0.05);而CXCL12+si-CXCR4组细胞中PI3K、NF-kB p65蛋白的表达水平及P-Akt/Akt的比值低于CXCL12组，但仍高于control组（P＜0.05)。　　结论：CXCL12/CXCR4轴能够通过靶向调控PI3K、Akt、NF-kB蛋白的表达，促进贲门癌细胞生长以及增殖的作用，从而影响贲门癌的发生和发展过程。　　第三部分环孢素A抑制HepG2细胞线粒体生物发生的研究　　目的：线粒体新生和功能失调与许多疾病发病相关，包括肝脏疾病。环孢霉素(CsA)，最常用的药物来治疗许多自身免疫性疾病和预防器官移植后排斥反应，有报道显示CsA能够引起线粒体损伤。然而， CsA对线粒体功能障碍的细胞机制目前仍未完全阐明。本部分研究为更深入的探讨CsA的治疗副作用，为其临床应用提供实验依据。　　方法：将HepG2细胞分为3组处理组：对照组（含DMEM培养基），CsA(100ng/ml)组(含DMEM培养基+100ng/ml CsA), CsA(500ng/ml)组（含DMEM培养基+500ng/mlCsA)，同时给予PCGl-a过表达质粒，通过RT-PCR、western blot法分别检测上述各组细胞中PCGl-a、NRFl、TFAM和p-CREB基因和蛋白的表达；使用Mitotracker Red示踪检测细胞内线粒体的数量；检测细胞线粒体DNA的拷贝数、ATP浓度以及细胞色素C氧化酶活性；细胞给予cAMP后，检测westernblot法检测细胞中PCGl-oup-CREB蛋白的表达。　　结果：CsA处理后，细胞内的PGC-la、NRF1、TFAM基因和蛋白水平明显降低（P＜0.05)，线粒体数量、DNA的拷贝数、ATP浓度以及细胞色素C氧化酶活性等也明显降低（P＜0.05)。过表达PGC-l a能逆转上述结果(P＜0.05);同时CsA能降低p-CREB蛋白水平(P＜0.05)，而当给予cAMP后，CsA处理后抑制PGC-la表达的作用得到逆转(P〈0.05)。　　结论：CsA能够通过抑制 CREB的活性，进而抑制PCGl-a/NRFl/TFAM信号通路，抑制线粒体新生，导致线粒体功能障碍。