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目的通过研究Micro RNAs(mi RNAs)在HBV相关慢加急性肝衰竭患者(HBV-related Acute-on-Chronic Liver Failure,HBV-ACLF)肝组织和外周血清表达,探讨mi RNA能否作为一种新型、无创的HBV-ACLF预后判断标记物。同时,拟从mi RNA靶基因水平初步探讨HBV-ACLF潜在发病机制。方法对1例HBV-ACLF患者的肝组织和1例年龄、性别相匹配的正常供肝组织,利用micro RNA芯片技术,筛选差异性表达mi RNAs。应用实时荧光定量PCR(Real-Time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR),验证上述差异性表达的mi RNAs在肝组织(HBV-ACLF患者8例,正常对照8例)中的表达,并进一步检测其在血清标本(HBV-ACLF39例,正常对照20例)中的表达情况。将前述39例HBV-ACLF患者依据3个月内临床转归情况,分为恢复组(n=20)和未恢复组(n=19,其中9例死亡,10例行肝移植术),比较HBV-ACLF不同预后组患者血清中mi RNA差异性表达,分析差异表达的mi RNA与MELD评分、PTA、INR等肝衰竭预后模型或指标的相关性,并进一步采用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)评价mi RNA对HBV-AC LF预后评估的诊断价值。利用常用靶基因预测软件(mi RWalk,Target Scan和mi Randa),对预后相关mi RNA的靶基因进行预测,q RT-PCR检测HBV-ACLF患者肝组织中相应靶基因表达,从靶基因水平初步探讨mi RNA参与HBV-ACLF发病的可能信号通路。结果(1)micro RNA芯片筛选结果显示,与正常对照相比,HBV-ACLF肝衰竭肝组织mi RNA表达上调89条,下调99条(差异性表达均≥5倍)。结合mi RNA与肝病的相关文献,筛选出9条差异性表达mi RNAs(表达上调的是mi RNA-21、mi RN A-130a、mi RNA-143、mi RN A-200,表达下调的是mi RNA-486-5p、mi RN A-192、mi RN A-194、mi RNA-148、mi RNA-122)做进一步研究。(2)在8例HBV-ACLF患者和8例年龄、性别相匹配的正常对照组,q RT-PCR检测表明,与正常肝组织相比,HBV-ACLF患者肝组织中mi RN A-130a、mi RN A-486-5p及mi RNA-200表达上调,mi RN A-192,mi RNA-148及mi RN A-122表达下调,且均有统计学意义(p<0.05);除mi RNA-486-5p外,这与micro RNA筛选结果一致。在39名HBV-ACLF患者和20名年龄、性别相匹配的正常对照组血清中,q RT-PCR检测结果显示:与正常对照组相比,除mi RN A-194以外,8条mi RN As(mi RNA-21,mi RNA-130a,mi RN A-486-5p,mi RN A-192,mi RN A-148,mi RNA-143,mi RNA-122,mi RNA-200)在HBV-ACLF患者血清中表达均显著上调,且有统计学意义(p<0.05)。(3)依据3个月内不同临床转归分组,发现mi RNA-130a和mi RNA-486-5p在恢复组HBV-ACLF患者血清中均表达上调(p<0.05)。进一步统计分析显示,在HBV-ACLF患者中,mi RNA-130a与INR(r=-0.38,p=0.03)、PT(r=-0.41,p=0.02)和MELD评分(r=-0.39,p=0.03)负相关,与PTA(r=0.36,p=0.05)正相关。而mi RNA-486-5p与上述凝血指标及MELD评分无相关性(p>0.05)。ROC评价mi RNA-130a对HBV-ACLF患者3个月的存活的预测作用,mi RNA-130a、MELD评分ROC曲线下面积(AUC)分别为0.74(95%CI0.571-0.91,p=0.02),0.86(95%CI 0.720-0.991,p=0.00),且两者之间无统计学差异(p=0.163)。以上结果提示mi RNA-130a对HBV-ACLF预后判断有较好的价值。(4)靶基因预测软件(mi RWalk,Target Scan和mi Randa)分析显示,糖原合成酶激酶(Glycogen synthase kinase,GSK)为mi RNA-130a的靶基因。利用q RT-PCR,检测11例HBV-ACLF,6例年龄、性别相匹配的正常肝组织中GSK表达情况,发现与正常供肝相比,HBV-ACLF患者肝组织中GSK表达有下调趋势(p=0.078)。结论(1)血清mi RNA-130a在HBV-ACLF患者肝组织和血清中均表达上调,并且与其预后相关,推测mi RNA-130a可作为一种无创的HBV-ACLF预后评估指标。(2)在体内mi RNA调节网络中,mi RNA-130a可能通过对靶基因GSK的调节参与HBV-ACLF的发病。