滋阴泻火中药对达那唑性早熟模型大鼠下丘脑Ghrelin及其受体的影响

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目的:以达那唑诱导的雌性性早熟大鼠模型为研究对象,观察性早熟大鼠模型青春期启动时下丘脑中营养相关因子Ghrelin及其受体GHSR1-α的表达变化,探讨Ghrelin/GHSR1-α在性早熟大鼠青春期启动中的作用;通过滋阴泻火中药干预性早熟模型大鼠,观察滋阴泻火中药对大鼠下丘脑Ghrelin及其受体GHSR1-α表达的影响,从而揭示滋阴泻火中药延缓青春期发育的机制。方法:(1)选择3日龄SD雌性大鼠40只,随机分为正常组(N)、模型组(M)、生理盐水干预组(MS)和中药干预组(TCM),每组10只。M、MS和TCM组大鼠于5日龄每只皮下注射达那唑300μg进行造模。15日龄时,TCM组开始每天定时喂饲滋阴泻火中药,MS组给予等剂量的生理盐水,每5天称大鼠体重一次。20日龄时开始每天观察动物阴门开启情况,以大鼠阴门开启作为青春启动的标志。(2)选择阴门开启的模型组大鼠作为处死时间点,同时选择相应数量的剩余三组大鼠一并处死,留取大鼠外周血、下丘脑、卵巢、子宫等标本,计算子宫及卵巢指数。(3)采用放免法检测外周血中E2、FSH、LH及Leptin, Ghrelin和IGF-1的水平和下丘脑Ghrelin、GnRH的含量,受体GHSR1-α的个数及活性变化。(4)采用Real-time PCR法检测大鼠下丘脑Ghrelin及其受体GHSR1-α mRNA的表达变化。(5)应用SPSS13.0进行统计分析,结果以均数士标准差(x±S)表示。多组间比较采用One-Way ANOVA单因素方差分析或Kruskal-Wallis H多样本的非参数检验,两组间比较采用LSD或Mann-Whitney U方法,数据的相关性分析采用Bivariate-correlation方法进行。结果:(1)各组大鼠青春期启动指标的比较:M组和MS组大鼠阴门开启的时间提前,为21-23日龄,早于N组和TCM组;TCM组外周血清E2(19.97±2.62pg/ml)、LH(16.96±1.31mIU/m1)、子宫指数(49.71±5.50)和下丘脑GnRH(18.15+3.67pg/m1)明显低于M组(24.67±4.05pg/ml、69.34±9.60、18.83±1.11mIU/ml、23.81±3.99pg/m1)和MS组(24.11±2.52pg/ml、66.53±6.87、18.81±1.08mIU/ml、22.70±2.52pg/m1)(P<0.05),接近N组水平;TCM组卵巢指数(44.46±7.51)明显低于MS组(55.03±8.02)和N组(51.18±5.00)(P<0.05)。(2)大鼠能量代谢指标的比较及与性发育指标的相关性分析:15日龄时M组体重(36.97±4.77g)明显高于N组(32.71±4.74g)(P<0.05),TCM组15、20、23日龄体重(32.59±3.92g、44.38±8.16g、59.15±10.60g)明显低于模型组(36.97±4.77g、53.49±8.91g、69.95±9.54g)(P<0.05);中药干预组血中Leptin、 Ghrelin和IGF-1的水平分别为6.74±0.83ng/ml、67.08±16.17ng/mg和262.60±28.77ng/ml,与M组(7.10±1.05ng/ml、70.36±13.82ng/ml、250.04±31.97ng/m1)和MS(7.13±1.17ng/ml、82.70±16.56ng/ml、256.62±31.84ng/m1)组比较无明显差别(P>0.05),且各组内能量代谢指标与性发育指标相关性不显著。(3)各组大鼠下丘脑Ghrelin/GHSR1-α基因的表达的比较:在Ghrelin和GHSR1-α基因的转录水平,M组(0.82±0.03、0.91±0.05)和MS组(0.87±0.03、0.88±0.03),明显低于N组(1.00±0.02、1.00±0.05)(P<0.01),而TCM组(0.96±0.05、1.00±0.02)则明显高于M组和MS组(P<0.01);而各组间下丘脑Ghrelin蛋白含量和GHSR1-α有效个数及活性无显著的统计学差异。结论:以达那唑诱导的性早熟大鼠模型在青春启动时,下丘脑Ghrelin及其受体的mRNA的含量下降,提示Ghrelin及其受体可能参与青春期启动的过程;滋阴泻火中药预防性干预可以延缓性早熟大鼠的青春期发育,对下丘脑Ghrelin及其受体基因的转录具有一定的上调作用。
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