番茄黑环病毒(Tomato black ring nepovirus, TBRV)和建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是我国进境植物检疫法规中明确规定的危险性有害生物。目前,国内在两种病毒的检疫检测方法如生物学检测、电镜检测、血清学检测、分子生物学以及分子检测方法的灵敏度的报道相对比较少。本文就两种病毒的检疫检测方法进行研究,取得了以下的成果。1研究结果表明:通过汁液摩擦接种的方法接种几种鉴别寄主,筛选出检测TBR的一套鉴别寄主。2建立了TBRV酶联免疫吸附检测方法;首次建立了TBRV的免疫电镜观察方法,在血清学检测阳性的样品中可清楚观察到病毒粒子,病毒粒子球形。3根据国际基因库中已公布的TBRV的外壳蛋白基因和运动蛋白基因,设计了4对特异性引物,首次建立了TBRV的反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫捕获反转录(IC-RT-PCR)检测方法;选取了TBRV的3个分离物的保守区段,设计了特异性引物和MGB探针,建立了TBRV的实时荧光PCR检测方法;采用质粒稀释梯度的方法来进行TBRV的分子生物学的灵敏度检测,灵敏度检测结果表明:能检测TBRV最低病毒量为:10-8ug/ml水平,与普通的PCR相比,检测的灵敏度提高了100倍。4根据已经公布的CymMV的外壳蛋白的序列设计了两对引物,采用RT-PCR、IC-RT-PCR方法对口岸进境后监管的兰花上的建兰花叶病毒进行分子生物学检测。RT-PCR、IC-RT-PCR方法结合序列测定,可以准确的检测建兰花叶病毒;质粒稀释方法对CymMV的分子生物学检测的灵敏度的结果表明:检测到的CymMV的最低病毒含量为10-7μg/ml水平,即检测的最小拷贝数为428个。