【摘 要】
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目的:神经营养因子(NTFs)包括神经生长因子(NGF)、脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、神经营养素-3(NT-3)、神经营养素4/5(NT4/5)、神经营养素-6
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目的:神经营养因子(NTFs)包括神经生长因子(NGF)、脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、神经营养素-3(NT-3)、神经营养素4/5(NT4/5)、神经营养素-6(NT-6)等几种.它们具有高度同源性.实验证明神经因子家族中的BDNF对神经元有支持存活、增进代谢、有助分化和再生等作用.对于外周听觉神经系统,BDNF、NT3、NGF等表达水平的改变与听神经末梢的发育、分布有密切的关系,贯穿于从听板形成至corti器毛细胞与传入、传出听神经末梢间建立突触关系的全过程.该文的研究内容是克隆BDNF基因并插入到pcDNA3.1(-)中,以脂质体转染到COS7细胞后检测其表达,转染到骨髓基质细胞(BMSCs)后检测其上清对体外培养的螺旋神经节细胞活力的影响.方法:1.脑源性神经生长因子BDNF基因克隆及其表达载体构建.首先抽提人胚脑总mRNA,以RT-PCR扩增出BDNF基因片段并构建测序载体,测序证实克隆基因序列后将BDNF基因插入真核表达载体pcDNA3.1(-)中,电泳证实.2.BDNF基因工程细胞模型的建立及活性检测.首先将载体以脂质体转染到无BDNF背景的COS7细胞中,以免疫组织化学检测证明其可以表达出BDNF产物,再转染到骨髓基质干细胞,取上清液加到螺旋神经节细胞培养基中,通过MTT检测其表达产物对细胞活力的影响.结果:该研究结果发现构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)-BDNF可以在COS7细胞中持续表达,其产物可有效保护培养的螺旋神经节细胞.结论:该研究成功克窿了人BDNF基因并建立起基因工程细胞;探讨了人BDNF基因的克窿及基因转移后其表达产物对听神经元的保护作用,证明BDNF基因工程细胞表达产物对体外螺旋神经节细胞有保护.
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