因烈性传染病、外来猪种杂交,保种费用高等原因,我国地方猪种遗传资源面临灭绝的危险日益严重,而精液冷冻保存库则是解决这些困境的有效措施。本文首先采用液氮喷入法（大型产业化精液冷冻设备,5至-10℃时的降温速度为-15℃/min,-10至-140℃时的降温速度为-40℃/min）,甘油浓度3%、0.25m L细管,采用精子质量计算机辅助分析系统等技术对2-4岁湖南地方猪（宁乡猪、大围子猪、沙子岭猪、湘西黑猪）,通过手握法对采集的猪精液现场1:1稀释后,17℃运输至实验室,镜检,加Ⅰ液,离心,去上清,4℃1.5h以上加Ⅱ液,15min内完成0.25ml细管装管并冷冻。其次为解决公猪头数少、种猪资源场距离导致精液收集困难等问题,对简易、便携的液氮面距离法（模拟液氮喷入法冷冻程序）进行了研究,然后进行液氮喷入法与液氮面距离法精液冷冻效果的比较,最后进行了冻精解冻技术的完善。结果如下:1.液氮喷入法猪精液冷冻技术研究本试验采用液氮喷入法制作了湖南4个地方猪（宁乡猪、沙子岭猪、大围子猪、铁骨猪）冷冻精液,铁骨猪平均冷冻前后活力最高,平均分别可达72.2%,48.2%,与宁乡猪冷冻前后活力差异不显著（70.6%,46.4%）（P>0.05）,与沙子岭猪（64.8%,40.9%）和大围子猪（62.5%,38.1%）存在显著性差异（P<0.05）;四个湖南地方品种猪的冻后活力损伤无显著性差异（24.4%）（P>0.05）;四个湖南地方品种猪中（宁乡猪、沙子岭猪、大围子猪、铁骨猪）,平衡密度越高（0.341、0.246、0.301、0.165）,解冻密度越高（0.327、0.222、0.245、0.158）;沙子岭猪的射精量最高（310m L）,射精量由高到低的顺序为沙子岭猪（310m L）>铁骨猪（263m L）>宁乡猪（246m L）>大围子猪（242m L）,差异显著（P<0.05）。结果表明:1)个体原精质量显著高于冻精质量（P<0.05）,冷冻活力与鲜精活力成正相关,平衡密度与解冻密度成正相关,射精量成细管支数成正相关;2)采精量高的猪不一定有好的活力。因此,可以挑选出抗冻能力较强的品系建立冷冻保存库。2.液氮面距离法猪精液冷冻技术研究在冷冻方法如上的基础上,采用液氮面距离法,泡沫箱规格（长35cm、宽35cm、高48cm、厚5cm）,液氮面一步法,高度3cm、5cm、7cm冷冻的精子曲线运动（CM）差异不显著（P>0.05）,高度3cm、5cm冷冻的精子运动（M）、局部运动（LM）、活力（V）显著高于7cm的M、LM、V（P<0.05）,其中3cm液氮面高度的活力最好（52.17±6.12）%。液氮面分步法,将细管置于自动升降冷冻装置不同高度冷冻,精子的M、CM、LM无显著性差异（P>0.05）,其中置于铁网格下1cm液氮面高度的活力最好（51.6±8.1）%;置于自动升降冷冻装置铁网格下1cm、下2cm的活力（V）,快运动（FM）显著高于自动升降冷冻装置的铁网格上1cm、上0cm和下3cm（P<0.05）。因此,液氮面距离一步法解冻后活力与液氮面分步法解冻后活力差异不显著,但多步法操作更复杂。3.猪精液液氮喷入法与液氮面距离法方案的比较液氮喷入法冻后活力为（63.4±15.3）%,而液氮面距离一步法冻后活力为（47.7±5.1）%,液氮面距离分步法冻后活力为（45.8±10.3）%,液氮喷入法显著优于液氮面距离法（P<0.05）,液氮面距离一步法和液氮面分步法差异不显著（P>0.05）。液氮喷入法缺点是耗时长,若做少剂量的细管,会浪费大量液氮,成本高。因此,有条件时应尽量应用液氮喷入法,否则可以采用液氮面距离一步法。4.猪精液解冻方法的研究采用38℃30s方法解冻,精子活力（33.6±0.13）%、顶体完整率（38.8±1.7）显著高于45℃30s组、52℃30s组、60℃30s组（P<0.05）,顶体完整率差异不显著（P>0.05）,其畸形率和60℃30s组差异显著（P<0.05）,但与45℃30s组和52℃30s组差异不显著（P>0.05）。因此,38℃30s水浴更为适合湖南地方猪0.25m L细管猪冻精解冻。综上所述,对于湖南地方猪精液冷冻,采用甘油浓度为3%、精子密度为2.0×10~9个/m L,0.25 m L细管,有条件时应尽量采用液氮喷入法,否则可以采用液氮面距离一步法,冻精解冻时采用38℃30s水浴能获得较好效果。