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2016年,美国首次报道了猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)。其后,中国、韩国、波兰、意大利、英国、巴西、泰国、丹麦、德国、西班牙等国家陆续出现有关PCV3的感染病例。PCV3的临床症状包括猪皮炎与肾病综合征、母猪繁殖障碍、仔猪心脏和多系统炎症、仔猪腹泻等,这些症状与猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)的临床症状极其相似,给临床上PCV3的检测和诊断带来一定的难度。作为一种新出现的病原,PCV3对养猪业的影响难以估计。本研究收集2016~2017年广东和广西地区15个猪场共403份样品,其中203份来自7个不同地区的仔猪先天性震颤发病猪群组织,200份来自8个不同地区的母猪群组织,传统PCR结果显示403份样品中PCV3阳性率为17.87%。本研究首次在仔猪先天性震颤猪群中检测到PCV3病原,其阳性率为26.60%;母猪群中PCV3阳性率为9.00%。对7个PCV3阳性的仔猪先天性震颤发病猪场进行流行病学调查,结果表明先天性震颤在初产母猪中发病率为20~50%,在新生仔猪中发病率为2.00~6.05%,在畸形仔猪中发病率为48.58~79.10%;PCV3阳性的先天性震颤发病的猪群中既存在PCV3单独感染,也存在与非典型猪瘟病毒(Atypical porcine pestivirus,APPV)、猪delta-冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhoea virus,PEDV)、猪库布病毒(Porcine kobuvirus,PKV)、蓝耳病病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)和猪萨佩罗病毒(Porcine sapelovirus,PSV)病原混合感染的情况。本研究一共获得15株PCV3全基因序列,其中7株来自仔猪先天性震颤猪群,8株来自临床症状各不相同的母猪群。序列分析结果表明PCV3全基因序列高度保守,所有PCV3全基因序列间的相似性为为97.30~100%,可分为3个进化分支;与其他圆环病毒(Circovirus)相比,蝙蝠圆环病毒(Bat circovirus,BtCV)KJ641716毒株与PCV3的进化分支最近;PCV3复制酶蛋白基因(Replication protein,Rep)序列相似性为98.8~100%,衣壳蛋白(Capsid protein,Cap)为98.1~100%。预测结果表明PCV3 Cap蛋白第1~36位氨基酸为信号肽序列。针对PCV3 Rep基因保守区域设计一对检测PCV3的特异性引物,通过基因克隆技术获得PCV3阳性标准品,获得具有良好线性关系的标准曲线并成功建立一种检测PCV3的SYBR Green实时荧光定量PCR方法。该方法具有良好的特异性,与猪口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)、猪水疱病病毒(Swine vesicular disease,SVDV)、猪塞内加谷病毒(Senecavirus A,SVA)、猪博卡病毒(Porcine bocavirus,PBoV)、典型猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)、PEDV、PKV、PSV、PDCoV、PRV、PRRSV和PCV2等常见病原体均无交叉扩增反应;灵敏性高,最低病毒检出量为1.73×10~2copies/μL;重复性好,组内和组间的变异系数(Coefficient of Variations,CVs)均小于2.27%。运用该方法对203份仔猪先天性震颤发病的组织样品进行PCV3病原检测,结果表明PCV3检出率(86.70%)高于传统PCR(26.60%)。根据信号肽预测结果,本研究设计一对扩增切除信号肽序列后的PCV3 Cap基因引物,成功构建重组表达质粒pET32a-PCV3 Cap。将重组质粒pET32a-PCV3 Cap转化大肠杆菌BL21(DE3)中,成功诱导并获得分子量约38 kDa的融合蛋白PCV3 Cap。SDS-PAGE分析结果表明PCV3 Cap融合蛋白的最佳诱导时间为4 h,表达形式为不可溶的包涵体。运用Ni柱纯化原理成功纯化得到融合蛋白PCV3 Cap,以此为免疫原免疫小鼠,获得8株能分泌抗PCV3 Cap蛋白抗体的阳性杂交瘤细胞株,通过小鼠体内诱生法制备获得腹水,其中A8F和C11C株腹水效价大于1:64,000。Western Blot结果表明PCV3 Cap融合蛋白能与单克隆抗体发生特异性反应,具有良好的抗原性。本研究为今后PCV3的防控提供了良好的技术支持和理论基础,具有重要的生产实践意义。