第一部分中晚期宫颈鳞状细胞癌同步放化疗敏感性相关血清microRNA的初步研究[背景与目的]宫颈癌是全球最为常见的女性恶性肿瘤之一。作为发展中国家之一,我国目前宫颈癌的发病率仍位居女性生殖系统三大恶性肿瘤之首。循证医学的有力证据将同步放化疗确立为目前中晚期宫颈癌的标准治疗模式,较以往的单纯放疗明显提高了疗效。临床实践中常常发现,中晚期宫颈癌患者即使临床病理因素相似,接受同步放化疗的疗效也往往存在差异,可见肿瘤对放化疗的内在敏感性起了至关重要的作用。microRNA是一类非编码小分子RNA,在肿瘤的发生发展及其它功能的调控中起到广泛而重要的作用,其在放化疗敏感性方面的作用也越来越受到重视。本课题组既往基于宫颈癌患者肿瘤组织标本进行了宫颈癌放化疗敏感性相关microRNA的研究,通过microRNA表达谱芯片分析发现放疗抗拒组和放疗敏感组患者宫颈癌组织中共有170个microRNA呈显著差异表达。结合靶基因预测网站的预测分析及文献检索,选取了其中在恶性肿瘤中研究较为广泛且表达差异在2倍以上的6个microRNA作为区分抗拒组和敏感组的目标nicroRNA。这6个microRNA分别为miR-101、miR-125a-5p、miR-365、miR-886-3p、miR-1285和miR-492,前4个在放疗抗拒组高表达,后2个低表达。经Hierarchical聚类分析发现上述6个microRNA可以较好地区分治疗抗拒组和敏感组。但研究中也体会到采集肿瘤组织标本受到的制约较多。近年来血液中microRNA相关研究发展迅速,其在取材,保存及临床推广前景等方面具有很大优势。本研究针对宫颈癌患者血清标本,研究筛选与放化疗敏感性相关的血清microRNA,为确立预测宫颈癌同步放化疗敏感性的血清学标志物,以及探索针对放化疗抵抗的治疗新靶点打下基础。[材料与方法] 收集中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院2014年1月至2014年6月接受根治性同步放化疗的Ⅱb～Ⅳa期宫颈鳞癌患者的治疗前血清标本。以治疗结束12个月为界,12个月内肿瘤持续或进展,或发现新发肿瘤病灶者归入治疗抗拒组,而12个月内未发现肿瘤证据者归入治疗敏感组。选择临床病理因素匹配良好的患者20例,治疗抗拒组和敏感组各10例,组内再将5例患者等体积血清混合后提取血清总RNA,并进行microRNA表达谱芯片筛选。采用RQmanager 1.2和Data Asist V2.0软件分析筛选得到两组间差异表达显著的microRNA;进一步在对治疗抗拒组17例及治疗敏感组22例患者血清中采用定量PCR法对芯片筛选出显著差异表达的microRNA进行验证。[结果] 表达谱芯片分析得到治疗抗拒组与治疗敏感组间差异表达显著的microRNA (变化倍数大于2倍且P<0.05)有3个：miR-136(抗拒组下调)、miR-152(抗拒组上调)和miR-206(抗拒组上调)。扩大样本量的验证结果显示：miR-136(抗拒组下调)和miR-206(抗拒组上调)在两组间的表达差异明显,具有统计学意义(P<0.05)。[结论] 血清miR-136与miR-206可能与宫颈癌同步放化疗敏感性相关；血清miR-136表达下调和miR-206表达上调可能提示宫颈癌同步放化疗抵抗。第二部分早期宫颈神经内分泌癌32例临床分析[目的] 探讨早期(Ⅰb～Ⅱa期)子宫颈神经内分泌癌(NECUC)患者治疗后的生存及复发情况,并分析其预后影响因素。[方法] 收集中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院2005年1月至2013年12月收治的32例早期NECUC患者的临床病理资料。患者的中位年龄为37岁(23～57岁)；临床分期：按照国际妇产科联盟(FIGO)2009年的分期标准,Ⅰ b1期19例,Ⅰ b2期10例,Ⅱ a1期1例,Ⅱ a2期2例；病理分型：小细胞癌22例,非典型类癌1例,混合型癌9例；子宫颈局部肿瘤直径：≥4 cm者12例,<4 cm者20例。32例NECUC患者均接受子宫广泛性切除术+盆腔(或加腹主动脉旁)淋巴清扫术,其中15例保留了一侧或双侧卵巢,25例子宫颈深间质受侵(浸润深度≥1/2),21例淋巴血管间隙受累(LVSI),18例盆腔和(或)腹主动脉旁淋巴结有转移；10例患者术前接受了新辅助化疗(1～3个疗程),所有患者都接受了术后辅助化疗(3～6个疗程),15例患者术后接受了辅助放疗。随访截止时间为2014年7月,中位随访时间18个月(7～71个月)。回顾性分析NECUC的生存及复发情况,并探讨其预后影响因素。[结果]32例NECUC患者中,随访期内死亡者共13例。NECUC患者的2年和5年累积无进展生存率分别为54.2%和38.1%,中位无进展生存时间为29个月。2年和5年累积总生存率分别为56.1%和44.9%,中位总生存时间为31个月。随访期内共14例NECUC患者术后出现复发、转移,中位复发、转移时间为9个月(3～30个月)。复发、转移部位：盆腔复发2例；肝转移4例、肺转移3例、肾上腺转移3例、骨转移3例、脑转移2例、胰腺转移1例、腹主动脉旁及颈淋巴结转移1例,其中3例患者为多发性转移(转移部位≥2个)。14例复发、转移患者中,13例已死亡,1例带瘤生存。单因素生存分析显示,早期NECUC患者的预后与子宫颈局部肿瘤直径、临床分期明显相关(P<0.01),即子宫颈局部肿瘤直径>4cm、临床分期≥Ⅰ b2期者预后较差；而与年龄、肿瘤成分(指单一型癌和混合型癌)、子宫颈深间质受侵、ⅠVSI、盆腔和(或)腹主动脉旁淋巴结转移、新辅助化疗、术后辅助放疗以及术中是否保留卵巢无明显相关性(P>0.05)。[结论] 早期NECUC患者的预后较差,子宫颈局部肿瘤直径≥4 cm及临床分期≥Ⅰ b2期是影响其预后的不良因素。