【摘 要】
：
可传播性海绵状脑病（Transmissible spongiform encephalopathies,TSEs）也称为朊病毒病（prion diseases）,是一类可感染人类和多种动物罕见的致死性的神经系统退行性疾病,包括人类的克雅氏病（Creutzfeldt-Jakob disease, CJD）、GSS综合症（Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome,
论文部分内容阅读
可传播性海绵状脑病（Transmissible spongiform encephalopathies,TSEs）也称为朊病毒病（prion diseases）,是一类可感染人类和多种动物罕见的致死性的神经系统退行性疾病,包括人类的克雅氏病（Creutzfeldt-Jakob disease, CJD）、GSS综合症（Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, GSS）、Kuru病、家族性致死性失眠症（fatal familial insomnia, FFI）,以及动物的羊瘙痒病（Scrapie）、牛海绵状脑病（bovine spongiform encephalopathy, BSE）和鹿的慢性消耗性疾病（chronic wasting disease,CWD）等。尽管病变性PrPsc是主要致病因子的观点被人们广泛接受,但对其正常异构体蛋白PrPc的生物学功能了解甚少。有报道PrP可能参与淋巴细胞活化或作为某些神经细胞群的营养因子,PrP还可能在细胞粘附、识别、抗凋亡过程中起一定作用。寻找蛋白间相互作用是诠释蛋白质功能的重要手段。如果已知蛋白质生理功能,可以通过引入其结合伴侣来深入阐述其作用机制；如果对某个蛋白质的功能还了解甚少,也可以通过研究与其相互作用分子的功能来对该蛋白的潜在生理功能做出预测。近年来研究发现,PrPc能与多种功能蛋白发生相互作用,包括：小鼠神经细胞黏着分子（N-CAM）、突触囊泡蛋白（Synaptophysin）、受体结合蛋白2（Grb-2）、人37-kDa/67-kDa层粘连受体蛋白（37-kDa/67-kDa LRP）、微管相关蛋白tau蛋白、蛋白激酶CK2、微管蛋白（tubulin）以及神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）等。据此有人推测PrPc可能和其它一种或几种功能蛋白共同形成复杂的蛋白复合体,从而参与各种细胞内生理功能。鉴于PrPc在脑组织的表达含量最高,寻找能够与PrPc结合的神经蛋白就成为最优先考虑的问题。因此,本研究应用酵母双杂交系统,筛选人脑cDNA酵母表达文库,以期寻找可能存在的与PrPc结合的新分子,为深入探索PrPc的生物学功能提供新思路。本研究的主要结果如下：1.将编码aa 23-231的PrP蛋白序列克隆到酵母穿梭表达载体pGBKT7构建成诱饵质粒,确认无毒性作用和自激活作用后,筛选成人脑cDNA文库,获得147个阳性克隆,经过进一步测序分析,获得并最终明确15个与PrP可能相互作用的阳性候选蛋白。选择HAX-1蛋白进行深入的下游实验。运用体内、体外免疫共沉淀和GST pull-down实验,确证了二者的结合是生理性的。2.构建系列PrP缺失突变体,与全长HAX-1蛋白进行酵母双杂交,结果显示PrP序列中能够与HAX-1蛋白发生相互作用的区域位点位于第91位到第163位氨基酸。构建系列HAX-1缺失突变体,与全长PrP蛋白进行酵母双杂交,结果显示HAX-1序列中第38位到第129位的氨基酸在介导与PrP蛋白的结合中发挥重要作用。3.将表达PrP蛋白和HAX-1蛋白的质粒共同转染神经细胞SH-SY5Y与非神经细胞HEK293T,48小时后进行免疫荧光染色,证实两种分子空间上存在相互作用的可能。4.将不同质粒单独或者共同转染HEK293T或SH-SY5Y细胞后,每组加入H202终浓度为500μM,制备氧化应激模型,结果发现当两种蛋白同时表达时,表现出对H2O2刺激细胞凋亡明显的拮抗作用。5.PrP八肽区插入突变体PG9、PG14并不会影响PrP蛋白与HAX-1蛋白间的相互作用,当共同转染HAX-1基因以后,HAX-1蛋白进一步加剧了由突变体蛋白诱导的细胞毒性作用。总之,我们利用酵母双杂交系统筛选成人脑cDNA文库,筛选得到多个朊蛋白PrPC相互作用蛋白。运用体内、体外免疫共沉淀和GST pull-down实验,我们确证了HAX-1蛋白和PrP蛋白的结合是生理性的。进一步的功能学研究发现,pcDNA3.1-HAX-1与pcDNA3.1-PG5共转染细胞,可以提高细胞对H202的耐受性,但与pcDNA3.1-PG9、pcDNA3.1-PG14共转染,则会进一步增强PG9、PG14对细胞的毒性作用。
其他文献
研究背景:随着我国经济社会的快速发展和国民生活需要,女性普遍工作成为一种发展趋势,2000年我国25-54岁女性就业率已达到81.6%。我国儿童超重肥胖的问题也日趋严峻,2017年我国0-5岁儿童超重肥胖率为10.4%。既往国外研究（美国、澳大利亚）显示,母亲工作时长或者母亲在非标准时间工作均可能增加儿童超重肥胖风险,但这种影响可能对具有不同养育文化及传统的国家、以及同一国家但来自不同经济水平家庭
喜马拉雅旱獭和藏羚羊是栖息在我国青藏高原的重要的野生动物。青藏高原海拔约3250m-5000m,多为高山和荒漠草原地,氧气的分压较低,紫外线强,所以人和普通的动物会因为急性的危及生命的高原反应而难以在该地区生存。本课题采用了转录组测序技术,初步开展了两种野生动物所携带的RNA病毒的相关研究。本研究从喜马拉雅旱獭体内发现了一种新亚型的蜱传脑炎病毒,我们将其命名为喜马拉雅型。我们从200份的旱獭气管中
HCC肿瘤细胞基因组中,1号染色体长臂21-44区（Iq21-q44）的拷贝数扩增是频率最高的基因组拷贝数变异（copy number variations,CNVs）区段（可达51.7%）,如此高的扩增变异频率提示该DNA区段可能包含多个在HCC发生发展中具有重要作用的癌基因或者肿瘤驱动基因。但是,1号染色体长臂44号区段（1q44）尚未鉴定出功能明确的癌基因或者肿瘤驱动基因。通过整合分析公共数
朊病毒病,又称可传播性海绵状脑病（Transmissible spongiform encephalopathies,TSE）,它是一种罕见的、能够引起人类及多种动物脑组织海绵状病理改变的退行性疾病,潜伏期长,致死率为100%,可在同种动物之间进行传播。朊病毒病典型的神经病理学改变为脑组织中出现海绵状空泡样变性、淀粉样斑块沉积、神经元丢失和胶质细胞增生。其致病机制目前认为是由于机体正常的富含α螺旋
人感染高致病性 H7N9 禽流感（Highly pathogenic avian influenza H7N9,HPAIH7N9）病毒病例首次出现于2016年底的H7N9第五波疫情中,之后于2019年春再次出现。作为2013年出现的新型H7N9病毒的变异体,HPAI H7N9病毒的主要特征是其血凝素（Hemagglutinin,HA）蛋白裂解位点上出现多碱性氨基酸的插入,从而使H7N9病毒由低致病
研究背景和目的:荆门病毒是一类单股正链的分节段RNA病毒,由于其在进化上与黄病毒科的NS3和NS5有同源性,故暂时归类为黄病毒科的荆门病毒组,它也是世界上首次将分节段与不分节段黄病毒之间建立起关联的正链RNA病毒。荆门病毒是一组以节肢动物为传播媒介的虫媒病毒,它的代表病毒荆门蜱病毒（Jingmen tick virus,JMTV）是2010年首次在湖北省荆门市的微小扇头蜱（Rhipicephalu
目的 分析硫酸羟氯喹的药品不良反应（adverse drug reaction,ADR）报告，为安全用药提供参考依据。方法 分析某三甲医院2019年5月-2021年5月报告的硫酸羟氯喹ADR报告，对其年龄、用药原因、ADR发生时间、合并用药、ADR转归等进行统计分析。结果 13例报告中未见严重ADR报告，60岁以上患者占报告总体53.85%，且出现ADR的时间明显早于60岁以下患者。61.54%的
用16S rDNA的扩增、克隆和序列分析技术,对10份喜马拉雅旱獭的胃壁菌群进行分析,发现喜马拉雅旱獭的胃壁菌群以乳杆菌为主,占菌群结构的37%,其次为牛链球菌、肠杆菌、梭菌、葡萄球菌等,分别占菌群结构的11.9%、9.0%、3.9%、3.1%。通过对100份胃壁组织进行优势菌群的分离培养,我们得到的结果是：乳杆菌58株、黄单胞菌9株、埃希氏菌8株、芽孢杆菌5株、拟杆菌4株、分支杆菌4株等。分离培
观察不同疗法治疗轻中度糜烂型口腔扁平苔藓（OLP）的效果。选取我院收治的28例轻中度糜烂型口腔扁平苔藓患者,按照随机原则分为常规组、试验组。常规组采用曲安奈德溶液治疗,试验组在此基础上加用西吡氯铵含片,比较两组的用药效果。结果表明,试验组的治疗总有效率为92.86%,显著高于对照组的71.43%（P <0.05）,差异有统计学意义;治疗后,试验组的VAS评分、口腔黏膜病损面积均显著小于对照组（P
高中英语多模态教学有助于培养学生的综合学习能力,激发学生对英语学习的兴趣和潜力。因此,教师在高中英语教学时要紧跟时代和科技的步伐,不断更新自己的教学观念,注重学生多模态识读能力的培养。尤其是在英语阅读这方面,教师要充分挖掘学生的潜力,让学生真正学有所得。1.高中英语阅读多模态教学的必要性1.1与时俱进的科技的要求随着时代的进步以及高科技的迅猛发展,人们在很多情境下都会接触到英语。在以前,人们