燃煤型氟中毒雌鼠卵巢细胞凋亡及机制研究

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【目的】动态观察燃煤型氟中毒诱导雌鼠卵巢细胞凋亡并探讨其致卵巢细胞凋亡机制。  【方法】1.采用自由食用织金病区原煤加拌泥煤烘烤的玉米复制燃煤型氟中毒动物模型(对照组、中氟组、高氟组);2.动态观察雌鼠染氟期间牙齿的变化情况;3.采用离子选择电极法、高温灰化-氟离子选择电极法测定雌鼠尿氟、骨氟含量;4.于不同时间段(60d、120d、180d)动情期处死雌鼠,分离卵巢。①称重,计算卵巢的脏器系数。②电镜下观察卵巢组织亚微结构及颗粒细胞凋亡情况。③用TUNEL技术检测卵巢颗粒细胞凋亡细胞数。④采用比色法测定雌鼠新鲜卵巢组织中SOD、MDA的含量变化。⑤用免疫组化法检测卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Fas、Caspase-3的表达。  【结果】1.成功复制实验动物模型。2.随着染氟剂量增加以及染氟时间的延长,雌鼠氟斑牙症状逐渐加重。3.雌鼠尿氟、骨氟的含量随着染氟剂量的增加以及染氟时间的延长而增加。4.各组别在不同染氟时间卵巢脏器系数比较均无统计学意义(P>0.05)。5.染氟组的卵巢组织亚微结构产生变化,颗粒细胞出现凋亡。6.各对照组仅有少量的凋亡细胞,染氟组随着染氟剂量的增加和时间的延长,凋亡细胞数明显呈上升趋势。7.在染氟时间相同的情况下,随着染氟剂量的增加,SOD活性显著性降低,MDA的含量显著性升高;在染氟剂量相同的情况下,随着染氟时间的延长,SOD含量和MDA含量的变化无统计学意义(P>0.05)。8.随着染氟时间的延长,染氟组雌鼠卵巢组织Fas蛋白含量增加,各组两两比较均具有统计学意义(P<0.05)。在染氟剂量相同的实验中,中氟组各组两两比较均具有统计学意义(P<0.05),其他组别比较无统计学意义。9、染氟组卵巢颗粒细胞Caspase-3蛋白表达量与对照组相比均升高,但在180d时高氟组卵巢颗粒细胞Caspase-3蛋白表达量比中氟组蛋白表达量减少。  【结论】1.氟中毒对卵巢生殖功能的毒性作用的强弱与染氟剂量、时间有关;2.氟可损害雌鼠自由基代谢和抗氧化系统功能,损害程度与染氟剂量关系密切,与染氟时间关系不大;3.氟中毒诱导卵巢颗粒细胞氧化损伤能促进凋亡相关蛋白 Fas的表达和激活 Caspase-3活性来诱导卵巢颗粒细胞凋亡,推测这可能是氟中毒对卵巢损伤的重要机制之一。
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