小半夏加茯苓汤醇提物诱导人胃腺癌细胞BGC-823凋亡的实验研究

来源 :贵阳中医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:YISHUIXIAOFENG2501
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目的:本次实验开展了小半夏加茯苓汤醇提物对人胃腺癌细胞BGC-823的相关研究。探究该药物能否起到抑制肿瘤细胞增殖或促进肿瘤细胞凋亡作用,并通过检测细胞线粒体跨膜电位的变化和相关基因的表达揭示本方抗肿瘤的作用机制。  方法:本次实验运用了MTT法和CCK-8法来检测XBPF醇提物对胃腺癌细胞BGC-823的增殖抑制作用;通过凋亡双染实验检测XBPF醇提物对BGC-823的促凋亡作用;通过Rh123检测XBPF醇提物对BGC-823线粒体跨膜电位的影响;通过Q-RT PCR法检测XBPF醇提物干预下胃腺癌细胞BGC-823相关基因ERK、P53、c-fos、c-jun的表达。  结果:小半夏加茯苓汤含量标准测定,经高效液相色谱法检测得出结论,每毫克醇提物含6-姜酚0.75μg,总生物碱19.74μg;MTT法和CCK-8法检测XBPF醇提物对胃腺癌细胞增殖抑制作用,发现800μg/mL、700μg/mL、600μg/mL、500μg/mL、400μg/mL等不同浓度的小半夏加茯苓醇提物对胃腺癌细胞BGC-823均有的一定的抑制作用(P<0.01),MTT法和CCK-8法检测小半夏加茯苓汤醇提物作用于胃腺癌细胞BGC-823的半数抑制浓度分别608.106μg/mL和631.063μg/mL;凋亡双染法检测发现:与同时段的空白对照组和阳性组相比,12h和24h的实验组早期凋亡率和晚期凋亡率均升高(P<0.05);罗丹明123检测发现:与同时段的空白对照组相比,12h的实验组荧光强度升高(P<0.05),24h的实验组荧光强度显著升高(P<0.01)。与同时段的阳性药组相比12h的实验组荧光强度升高(P<0.05),24h实验组荧光强度显著升高(P<0.01);通过实时荧光定量PCR检测发现,与空白对照组癌基因ERK、c-fos的相对表达量显著降低,有统计学差异(P<0.01);抑癌基因P53的表达量升高(P<0.05),有统计学意义;细胞形态观察,在倒置相差显微镜下观察发现,实验组细胞形态发生变异,边界模糊,出现大量悬浮死细胞;空白对照组细胞形态稍有变化,边界清晰,胞质较丰富,胞核少量破碎;阳性药组细胞几乎全部死亡,细胞外形模糊,不规则,细胞核浓缩破裂,仅见少数活细胞。阴性组细胞形态正常,边界清晰,细胞质丰富,几乎不见死细胞。  结论:XBPF醇提物可以抑制胃腺癌细胞BGC-823的增殖。XBPF醇提物可能通过抑制癌基因和提高抑癌基因的表达量来阻断癌细胞增殖途径,起到促进癌细胞凋亡的发生。XBPF醇提物可能通过调节线粒体跨膜电位的变化来促使胃腺癌细胞BGC-g23凋亡的产生。
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