梅毒的快速诊断、免疫学以及分子生物学的研究

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背景和目的:梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的一种性传播感染疾病,与HIV感染及其传播率增长有关。因其症状隐匿,治疗常常被延误,导致更广泛的流行和传播。近些年来,很多国家包括中国都有梅毒复燃流行的报道,提醒我们必须采取措施制止梅毒的蔓延。在梅毒快速诊断方面,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)已经选择出一些具有高敏感性和特异性的试剂盒在全球范围推广。这些以重组抗原为基础的试剂盒在梅毒筛查中有望取代传统的筛查及确证试验,是未来大范围检测梅毒的高效检测手段。在治疗和预后方面,梅毒治疗后的RPR滴度持续阳性,虽然视为临床治愈,但其潜伏复发的危险使患者的心理负担始终不能消除。故探索血清抵抗的原因,分析其与免疫学因素的关系,最终达到心理生理的痊愈也是我们的研究任务之一。在流行病学方面,从1999年开始,美国疾病控制中心(Centers for Disease Control and Prevention,CDC)已经加大力度将消除梅毒作为一个全球性目标。其中一个重要任务是监控地方性爆发和传播,阻止其扩散到其他地区。而我们要研究梅毒的地方性流行病学和地方性爆发,必须开展其基因分型的研究。此外,应用RT-PCR的梅毒螺旋体DNA定量检测方法,对于观察治疗效果、病情发展、寻找血清抵抗的原因等都是一个新的方法和思路。方法:1.梅毒的快速诊断:1)以TPHA为金标准,评估几种重组梅毒螺旋体抗原为基础的快速酶联免疫诊断试验在临床上的应用价值。2)比较传统的快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)与重组梅毒螺旋体抗原为基础的梅毒快速试验的敏感性和特异性。2.梅毒的免疫学研究:1) 118例梅毒疗后的RPR滴度变化的临床资料分析。回顾性分析滴度的持续阳性与其年龄、性别、初始滴度、病期、治疗药物等相关影响因素的关系。2)与健康对照组比较,分析梅毒治疗前和治疗后血清抵抗的免疫学特点。3.梅毒螺旋体的分子生物学研究:1)提取梅毒患者外周血中的基因组DNA,筛选阳性标本进行基因分型:用巢式PCR以及RFLP技术,对不同病程时期的患者进行基因分型,是梅毒流行病学研究的基础。2) DNA载量:正规驱梅治疗前后,比较梅毒螺旋体在血液中的载量变化。通过RT-PCR方法,对6例外周血样本DNA的表达进行半定量分析。结果:1.1)几种试剂盒在血清检测及全血检测中均表现优良,血清敏感性很高。①Abbott Determine Syphilis TP test:敏感性为100%,特异性为98.9%。②SD BIOLINE Syphilis 3.0 test:敏感性为95.5%,特异性为97.9%。③VISITECT-SYPHILIS test:敏感性为94.0%,特异性为98.1%。④Syphicheck-WB test:敏感性为67.4%,特异性为98.8%。2) Abbott Determine Syphilis TP test:血清敏感性为100%,特异性为98.4%。RPR test:血清敏感性为65.1%,特异性为98.4%。2.1)血清抵抗的统计学分析结果:不同年龄组、性别组分析分别比较P<0.05。初始滴度分组P<0.05,差异有显著性,滴度为1:8患者抵抗比例高达61%。不同病期P<0.05,差异有显著性,潜伏梅毒比例高达45.6%,而一期梅毒血清抵抗者仅占10%。不同药物种类分组P<0.05,差异有显著性,苄星青霉素疗后血清抵抗比例只有28.3%,而大环内酯类为72.7%。2)未治梅毒患者组、血清抵抗梅毒患者组及健康组的T淋巴细胞亚群和NK细胞检测结果经统计学分析差异无显著性。3.1) 67例外周血标本中,32例为持续RPR阳性患者和5例RPR已经阴转的患者,检测梅毒螺旋体DNA结果均为阴性。30例RPR滴度在1:32—1:128之间的患者外周血中,检测到梅毒螺旋体DNA阳性的为5例。将这5例进一步进行巢式PCR检测,得到3种亚型:1个13c,2个14b,2个14d。2)治疗前患者血液中梅毒螺旋体的DNA载量明显高于疗后。结论:1.4种以重组梅毒螺旋体抗原为基础的试剂盒在临床实验中,血清检测比全血检测具有敏感性更高、特异性更强,适合应用于STD门诊的梅毒检测。以重组梅毒螺旋体抗原为基础的试验方法与RPR试验相比,具有更高的敏感性。2.潜伏梅毒、初始滴度较低者、以及治疗应用大环内酯类药物后的梅毒患者的血清抵抗率较高,统计学比较差异具有显著性。免疫学检测梅毒未治患者以及血清抵抗患者的T淋巴细胞亚群及NK细胞值无明显差异,可能与样本量过小有关。3.梅毒患者外周血内DNA检测尚需寻求敏感性更高的技术手段。血清抵抗与DNA载量的关系还需进一步验证。治疗前后血液中的病原体DNA载量有明显差异。
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