肿瘤的发生是一种多因素、多阶段、长期相互作用的过程。凋亡对于维持细胞增殖和细胞死亡在机体的发育和生命平衡中非常重要。许多有害因素如果破坏细胞凋亡的调控过程，可以引起肿瘤的发生，因此，细胞凋亡与肿瘤关系密切。肿瘤细胞凋亡调控过程伴随一些癌基因和抑癌基因的异常表达，而一些癌基因如AP-1，抑癌基因如P53是决定细胞凋亡的重要因素，且凋亡抑制因子Bc1-2在肿瘤细胞凋亡的信号调控过程中发挥重要的作用。因此，肿瘤细胞凋亡过程与正常细胞一样，需要信号分子的调控。活性氧作为细胞调控中的一种信号分子，诱导细胞凋亡，已经为广大从事生命科学的学者所接受。而本实验室前期研究的结果表明，活性氧能够诱导肿瘤细胞凋亡，推断ROS可能参与肿瘤细胞凋亡的信号传导过程。因此，研究活性氧在肿瘤细胞凋亡调控中的作用，特别是活性氧在肿瘤细胞凋亡过程中的信号调控机理，对于揭示肿瘤细胞的发生、发展的机理和肿瘤的治疗都有非常重要意义。 本课题是基于本实验室前期工作中，发现不同剂量活性氧在细胞中发挥不同的作用，尤其中等剂量ROS(50-400μmol·L^-1)诱导肿瘤细胞凋亡；同时，抗氧化剂对放化疗所致肿瘤细胞凋亡具有抑制作用，表明活性氧在肿瘤细胞凋亡中具信号调控作用。因此设计本课题，以进一步观察不同剂量ROS在诱导肿瘤细胞凋亡过程中可能的调控途径、对细胞凋亡相关因子的主要调控作用及各因子相互关系。 本课题以人HepG₂肝脏肿瘤细胞株为研究对象，通过给予不同剂量H₂O₂，观察细胞凋亡发生情况，氧化损伤情况，细胞内环境变化及相关蛋白表达情 第四军医大学颀士学位论文 一 况以及剂量效应关系，藉此研究活性氧诱导细胞凋亡的机理。 研究结果发现，H。O。处理 HepGZ细胞株后，引发氧化损伤，但未观察到 MDA的剂量效应关系；而凋亡相关指标，发生明显改变，有显著剂量依赖性： ①原位末端标记测定结果的灰度值随HZOZ的剂量改变而呈规律性变化；②流 式细胞术，DNA凝胶电泳检测表明，中。高剂量组HZOZ明显诱发细胞凋亡 并伴有损伤；③细胞内pH值因H。O。加入细胞内剂量不同而有起伏，④C／” 与HZOZ呈剂量效应关系；⑤免疫组化测定显示，随HZOZ剂量增高，BC12表 达随HZOZ浓度增高而有规律地降低；P53、C。叩踞e刁、hS、B。、CJufl、C－允S 则与前者表达呈相反趋势，但低剂量组各因于表达均无明显差异。HZOZ对各 因子均有明显调控作用。 研究结果提示，一定剂量的HZOZ虽无直接的细胞膜氧化损伤的形态学与 DNA改变，但流式细胞术结果进行推测，其损伤作用主要是表现为活性氧调 控凋亡的信号级联反应，而最终导致细胞凋亡发生；pH结果的起伏及低剂量 组突变型P53的反常表达提示ROS可能通过多种途径或方式调控相关因子逐 步实现细胞凋亡，而这些途径的变化可能与其浓度的变化有密切关系。 结论： 1、适当剂量＊＊S可诱导肿瘤细胞凋亡：低剂量的＊os可造成细胞的损 伤，但不足以诱导细胞凋亡，但这一损伤过程同样启动凋亡信号系统的相关 信号因子的表达，使细胞具有凋亡趋势。 2、在肿瘤细胞凋亡中的ROS的损伤与调控作用共同存在，但不同剂量 ROS的损伤作用在凋亡中发挥作用不同。 3、ROS可能通过多种途径调控肿瘤细胞凋亡，其调控途径与其浓度的变 化有密切关系；各因于与ROS之间相互调节，互为因果，形成信号循环途径， 并级联放大；但各途径的调控均以吩吓 P53为变化核心。 4、＊＊8对各因子表达的凋控勺其在圳胞凋亡小不同作用有关，对促凋亡 第3 页 第四军医大学硕十学位论文一因子的表达，以直接调控为主，对抑凋亡因子的表达以间接抑制为主，而抑凋亡因子针对ROS会有应激代偿性表达。