研究目的： 探讨福尔肝健脾软肝方抗二甲基亚硝胺(DMN)诱导大鼠肝纤维化的作用及机理。分析健脾软肝方全方组及拆方抗肝纤维化的配伍关系与组方意义。 研究方法: 1.药物制备：将福尔肝健脾软肝方及拆方按成人每日所需生药量换算成大鼠所需药量,浸泡、煎煮、浓缩成1444ml药液:鳖甲软肝片根据使用剂量说明按成人每日所需生药量换算成大鼠的等效剂量,根据等浓度把鳖甲软肝片溶于蒸馏水中.4℃冰箱密封保存备用。 2.造模:将实验大鼠随机分为正常组和造模组。造模组大鼠按照 0.2ml/100gwt.d<-1>腹腔注射 0.5﹪二甲基亚硝胺(DMN)溶液复制大鼠肝纤维化模型.每日一次,每周连续两次,共四周；正常对照组不给予任何处理。 3.分组给药：四周造模结束后将实验大鼠随机分成正常组、模型组、鳖甲软肝片组、健脾软肝方全方组、健脾活血软肝组、理气活血软肝组、活血软肝组和健脾理气组,共计八组.治疗组六组大鼠按临床等效量计算,以 10ml/kg/天大鼠体重的容积分别灌胃,四周,模型组及正常组大鼠同时以10ml/kg/天生理盐水灌胃。 4.测定大鼠:体重、肝脏湿重、脾重并计算肝重/体重以及脾重/体重比值。 5.测定大鼠血清肝功能：赖氏法测定血清谷丙转氨酶 (ALT) 活性:比色法测定谷草转氨酶(AST)活性；双缩脲法测定总蛋白(TP)含量；溴钾酚绿比色法测定白蛋白(Alb)含量；咖啡因比色法测定血清总胆红素(Tbil)含量。 6.病理学观察：HE染色观察肝脏炎症；天狼猩红胶原病理染色观察肝脏纤维化病理形成过程和程度。 7.肝组织生化检测：比色法检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量；盐酸水解法测定肝组织肝羟脯氨酸(Hyp)含量。 8.血清肝纤维化指标检测：酶联免疫法测定血清透明质酸(HA)含量,及血清三型胶原(PCⅢ)含量。 9.实验结果进行统计并分析。 结果： 1.正常组大鼠肝脏颜色鲜红,质地柔软,富有弹性,无腹水；模型大鼠肝脏表面呈暗红色,体积缩小,质地稍硬,部分表面呈颗粒状,边缘较钝,其中模型组大鼠有7只腹腔内均可见到腹水.实验大鼠死亡率为19.47﹪。 2.与正常组大鼠比较,模型组大鼠肝重及肝重/体重比指数显著降低(P<0.05),脾重和脾重/体重比指数均显著增加(P<0.05),经药物治疗后,各组均有所下降,尤以健脾软肝方全方组脾重及肝脾体比下降明显。 3.与正常组对比,模型大鼠血清肝功能明显异常(P<0.05),肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量、血清三型胶原(PCIII)含量、血清透明质酸(HA)含量均明显升高(P<0.05),肝组织HE染色显示模型大鼠肝小叶结构被破坏,肝细胞有广泛变性坏死,胶原染色显示,模型组大鼠肝组织有广泛胶原沉积。标志大鼠肝纤维化模型制备成功。 4.与正常组比较；模型组大鼠肝功能明显异常,血清ALT与.AST活性,血清总蛋白含量明显增加,血清白蛋白含量明显降低,白球比值倒置,血清总胆红素显著增加,表现为明显肝损伤。治疗后,给药六组与模型组大鼠比较各项指标均有所改善(P<0.05),尤以健脾软肝方全方组改善显著。 5.病理学HE及胶原染色:HE染色显示与正常组大鼠比较,模型大鼠肝小叶结构被破坏,肝细胞有广泛变性坏死,大量的纤维增生。经治疗后,健脾软肝方全方组和复方鳖甲软肝片组大鼠肝变性坏死程度明显减轻,炎性细胞浸润减少,偶见散在的点状的坏死灶；胶原染色显示与正常组大鼠比较,模型组大鼠肝组织有广泛胶原沉积。治疗后,健脾软肝方全方组和复方鳖甲软肝片组大鼠肝组织胶原沉积程度明显减轻,其余各治疗组肝组织胶原沉积程度均有所减轻。 6.与正常组大鼠比较,模型大鼠肝组织肝羟脯氨酸(Hyp)含量、血清三型胶原(PCUI)含量、血清透明质酸(HA)含量均明显升高(P<0.01),表现为显著的肝纤维化病理特点.经药物治疗后,各药物组三项指标均有程度不等的下降；以健脾软肝方全方组作用最为明显(P<0.05).各用药组组间均无差异。 7.与正常组大鼠比较,模型组大鼠肝组织SOD活性明显下降,MDA含量显著升高,表现为显著的脂质过氧化损伤.经药物治疗后,各药物组SOD活性均有不同程度升高,以健脾软肝方全方组在升高SOD活性方面优于其它治疗组；各药物组MDA含量均有不同程度降低,以健脾软肝方全方组MDA含量降低较为明显,显示良好的抗肝脂质过氧化作用。 结论： 1.DMN腹腔内注射复制大鼠肝纤维化模型,造模4周后,模型组以肝纤维化病理改变为主。 2.健脾软肝方全方组及其拆方能改善模型大鼠一般情况、减少模型大鼠腹水的发生。 3.健脾软肝方全方组及其拆方能显著改善模型大鼠肝功能,抑制肝组织胶原过度沉积,促进胶原降解,具有良好的抗肝纤维化作用。 4.健脾软肝方全方及拆方能显著减少血清Ⅲ型胶原含量及HA含量,降低肝组织HYP含量,改善病理炎症及胶原沉积,起到良好的改善肝组织胶原沉积,促进胶原降解作用,尤以健脾软肝方全方药效最佳。 5.健脾软肝方及健脾活血软肝方能显著提高肝组织SOD活性,降低MDA含量,表明抗脂质过氧化是健脾软肝方及拆方抗肝损伤和抗肝纤维化作用的重要靶点之一。 6.健脾软肝方在减少模型大鼠腹水的发生、改善肝功能、降低肝Hyp含量和抗肝脂质过氧化方面较其它拆方显示良好的作用,表明中医"辨证论治"的指导思想在肝纤维化防治过程中具有重要作用,健脾益气、活血软肝法是治疗肝纤维化的重要方法。 7.健脾软肝方全方较其它拆方显示较好抗肝纤维化作用,与临床对肝纤维化病因病机认识和治疗疗效相一致,表明以健脾益气、理气活血、软肝化积为治则组方原则能发挥良好的抗肝纤维化作用。