类风湿关节炎（RA）是一种病因不明的慢性、系统性自身免疫性疾病，其最常见且最主要的病变是关节和滑膜的损害，常导致关节软骨和骨的破坏，甚至关节强直。RA病因尚未明确，但大多数研究认为，成纤维样滑膜细胞的肿瘤样增殖及其分泌的大量促炎性细胞因子、趋化因子和金属蛋白酶是导致关节滑膜增生、骨质破坏的主要因素。因此，抑制成纤维样滑膜细胞的增殖和活化，促进其凋亡，将有利于控制RA的发生和发展。然而，由于病因及发病机制不明，RA的治疗很难取得有效根治或病情进展的抑制。而RA属中医痹证范畴，主因素体亏虚，风寒湿热之邪乘虚侵入人体，导致肢体、经络痹阻，气血运行不畅而发病。因病程日久难愈，治疗难度较大。若以中西医结合治疗，各自发挥自己的优势，不但能取得较好的效果，而且不良反应小，患者依从性较好，因此往往能取得良好的疗效。　　一、临床部分：昆母汤治疗活动性类风湿关节炎临床观察研究　　目的：观察昆母汤治疗活动性RA的疗效，客观评价昆母汤治疗RA的临床疗效和安全性。　　方法：根据简单随机、对照、非盲的临床试验原则，收集符合诊断纳入标准和排除标准的活动性RA患者78例。将78例患者随机分为两组，治疗组予昆母汤联合甲氨蝶呤、塞来昔布胶囊治疗，对照组仅用甲氨蝶呤、塞来昔布胶囊治疗。疗程12周。观察并记录治疗前后患者临床症状体征（关节休息痛、关节肿胀程度、关节压痛程度、关节活动度、双手握力、压痛关节数、肿胀关节数、晨僵时间、患者及研究者病情总体情况VAS评分、疼痛VAS评分等）、血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）、类风湿因子（RF）、疾病活动度评分（DAS28）、安全性观察指标（血常规、肝肾功能），分析病情改善情况并进行统计学分析。　　结果：治疗12周后，治疗组临床综合疗效总有效率97.4%，对照组总有效率82.5%，治疗组优于对照组。两组治疗后临床症状、体征均较治疗前有所改善，且除关节休息痛、晨僵外，治疗组改善程度优于对照组。两组治疗后ESR、CRP、RF均有所下降，两组间比较，仅有CRP差异有统计学意义。两组治疗12周后DAS28明显低于治疗前，且治疗后治疗组DAS28下降程度更明显。　　结论：昆母汤结合MTX治疗RA比单纯MTX治疗在改善症状体征等方面疗效更显著，在控制疾病活动的炎性指标方面亦有确切疗效。　　二、实验部分　　（一）昆母汤醇提液对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖及凋亡的影响　　目的：观察昆母汤醇提液对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）增殖及凋亡的影响，探讨昆母汤醇提液对RA-FLS的作用机制。　　方法：滑膜组织取自行关节置换术或关节镜检查术的8例活动性RA患者，分离出FLS进行原代培养及鉴定。将体外培养的RA-FLS分为空白组、MTX组和昆母汤醇提液低、中、高剂量组，各组细胞分别加入相应药物培养12h、24h、48h、72h，采用MTT法进行细胞活性分析。流式细胞仪检测法检测昆母汤醇提液对RA-FLS细胞凋亡率的影响。　　结果：MTX在各时间段上可以抑制RA-FLS活性，且在12h、24h、48h之间具有时间依赖性，昆母汤醇提液高浓度抑制RA-FLS活性在24h和72h时较MTX明显。昆母汤醇提液各浓度抑制RA-FLS活性能力比较，中剂量组在24、72h，高剂量组在24、48、72h抑制活性较低剂量组明显，高剂量组在24h时较中剂量组抑制活性力更强，说明昆母汤醇提液抑制RA-FLS增殖能力在一定程度上呈剂量依赖性。昆母汤醇提液和MTX均可显著促进RA-FLS的凋亡，且昆母汤醇提液促RA-FLS凋亡能力在一定程度上呈剂量依赖性，昆母汤醇提液中浓度和高浓度促凋亡能力相当。　　结论：昆母汤可能能够抑制RA-FLS增殖，促进RA-FLS凋亡，具有治疗RA的潜在价值。　　（二）昆母汤醇提液对TNF-α诱导的人RA-FLS Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响　　目的：观察昆母汤醇提液对人RA-FLS抗凋亡因子Bcl-2和促凋亡因子Bax、Caspase-3表达的影响，探讨昆母汤对RA-FLS凋亡的影响与作用机理。　　方法：滑膜组织取自行关节置换术或关节镜检查术的8例活动性RA患者，分离出成纤维样滑膜细胞进行原代培养及鉴定。将体外培养的RA-FLS分为空白组、TNF-α组、MTX组和昆母汤醇提液低、中、高剂量组，各组细胞分别加入相应药物处理培养，24h后使用Trizol抽提总的RNA，通过半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）观察Bcl-2、Bax mRNA表达强度的变化，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白含量的变化。　　结果：与空白组比较，TNF-α组Bcl-2 mRNA、Bcl-2蛋白表达升高，Bax mRNA、Bax蛋白、Caspase-3蛋白表达降低。昆母汤醇提液高剂量组可促进TNF-α诱导的低表达Bax的表达，与TNF-α组比较，差异显著；MTX组和昆母汤醇提液低、中、高剂量组可抑制Bcl-2的表达，与TNF-α组比较，差异有统计学意义；昆母汤醇提液高剂量组抑制Bcl-2 mRNA、Bcl-2蛋白的程度较MTX明显，差异有显著统计学意义。昆母汤醇提液可使TNF-α诱导的低下的Bax/Bcl-2的比值上升，一定程度上且呈剂量依赖性。昆母汤醇提液高剂量可使低表达的caspase-3表达量增加。　　结论：昆母汤醇提液可能通过抑制Bcl-2的表达，同时促进Bax、Caspase-3的表达，调节Bax/Bcl-2比值来发挥对RA-FLS的促凋亡作用。 （三）昆母汤醇提液对TNF-α诱导的人RA-FLS OC相关因子的影响　　目的：观察昆母汤醇提液对人RA-FLS的核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）/骨保护素（OPG）mRNA表达的影响，阐述昆母汤是否通过改变RANKL、OPG的表达来减少破骨细胞数量和降低其活性，从而发挥抗RA骨质破坏的作用。　　方法：滑膜组织取自行关节置换术或关节镜检查术的8例活动性RA患者，分离出成纤维样滑膜细胞进行原代培养及鉴定。将体外培养的RA-FLS分为空白组、TNF-α组、MTX组和昆母汤醇提液低、中、高剂量组，各组细胞分别加入相应药物处理培养，24h后使用Trizol抽提总的RNA，通过半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）观察RNAKL、OPG mRNA表达强度的变化及RANKL/OPG值。　　结果：与空白组比较，TNF-α组RANKL mRNA表达升高，OPG mRNA表达降低。MTX和昆母汤醇提液低、中、高浓度对其高表达的RANKL mRNA有抑制作用，差异均有统计学意义，且高浓度比中浓度、中浓度比低浓度抑制力更强，但对其低表达的OPG mRNA，昆母汤醇提液各浓度均无影响。MTX和昆母汤醇提液低、中、高浓度对RANKL/OPG值均也有抑制作用，且昆母汤醇提液中、高浓度RANKL/OPG比值下降率更为明显。　　结论：昆母汤可能通过下调RA-FLS中RANKL/OPG的比值来间接调节破骨细胞的分化和活性，抑制骨质破坏，发挥抗风湿作用。