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急性下肢缺血是血管外科医生面临的挑战之一,其发病率约为1.7例/10000人/年,尽管近年来该病的诊断和治疗方面已取得很大的改进,但是其死亡率和截肢率仍高踞不下。双向凝胶电泳技术是目前用于蛋白质组研究的经典方法,随着近年来质谱分析技术的广泛应用于生物大分子的研究,蛋白质组学正成为国内、外学者研究的热点。本研究应用双向凝胶电泳、计算机图像分析和质谱分析技术对急性下肢缺血的血管的蛋白质表达进行研究,将有助于揭示该病的发病机制,为对该病更好的诊断和治疗开展新的思路。 首先,本研究通过动物试验建立兔急性下肢缺血模型,在不同的缺血时间下获得动物缺血血管,经总蛋白提取、定量后,进行双向凝胶电泳,应用银染的染色方法获得兔正常及缺血4小时、8小时、12小时和24小时的血管凝胶图谱,经计算机图像分析及配比后,结果显示:不同缺血时间蛋白质点总数分别为:225±36、256±45、254±41、269±52,平均配比率64.04%;平均偏差分析显示:正常、4小时、8小时、12小时和24小时各蛋白质点的等电点平均偏差为:0.0498±0.0268,分子量平均偏差为:0.9655±0.2230;对图谱的定性及定量的分析是目前在双向凝胶电泳研究中公认的方法,我们获得了正常表达的蛋白质点和异常表达的蛋白质点,分别得到了正常表达和异常表达的蛋白质点数据,其中异常表达的蛋白质点的Norm.Volume较参考胶高2.26-230.3倍。 通过银染的结果,提示分子量的平均偏差大于等电点的平均偏差,这可能是由于配制SDS-PAGE过程中的偏差造成的;对银染的凝胶分辨率的分析提示:样品的浓度测定的准确性、样品获得的时间、保存方式;灌胶是否均匀、胶条与胶面贴合是否紧密、电极缓冲液配制的浓度和时间:银染中固定、显色和终止染色等过程的准确把握等几方面的改进可以有效提高图谱的分辨率。