【摘 要】
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目的 1．探讨大胚龄人脑神经干细胞（neural stem cells，NSCs）的分离及培养方法。 2．探讨骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）对NSCs分化的影响。 方法 1．从16-2
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目的 1．探讨大胚龄人脑神经干细胞（neural stem cells，NSCs）的分离及培养方法。 2．探讨骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）对NSCs分化的影响。 方法 1．从16-20周胚龄胎脑室下区分离组织，采用机械法获得单细胞悬液，台盼蓝染色计数细胞存活率。 2．采用无血清培养基(DMEM／F12)，加入2％B27、EGF和bFGF培养NSCs，倒置显微镜下观察细胞的增殖情况；采用机械法分离法传代NSCs；采用免疫细胞荧光法检测神经上皮干细胞蛋白（nestin）及分化后神经细胞抗原的表达。 3．采用密度梯度离心结合贴壁分离法分离、纯化人BMSCs。 4．将人BMSCs和NSCs在体外通过不同的方式混合培养，实验分为三组：自然分化组、直接接触混合培养组及Transwell共培养组。观察BMSCs对NSCs分化的影响。采用免疫细胞荧光法及Western blot法检测各组神经元和星形胶质细胞标志物的表达。 结果 1．采用机械法从胎脑室下区获得的单细胞悬液，台盼蓝染色显示细胞存活率80％左右。 2．NSCs原代培养时，镜下见单个细胞呈贴壁生长。在生长因子EGF和bFGF的刺激下，2天后细胞分裂增殖形成3—5个细胞聚成的团块。随着团块直径增大，逐渐形成形态规则的神经球，并呈悬浮生长，球周边不断有分裂
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