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1、Twist基因是1987年Thisse B等首先在果蝇中发现的一个新基因。在脊椎动物中。Twist蛋白是属于碱性的螺旋-环-螺旋蛋白家族中的高度保守的转录因子,在胚胎的发生发展中发挥重要作用。此外Twist被认为是癌基因,影响肿瘤细胞凋亡,而且作为上皮间质转换(epithelial.Mesenchymal transition,EMT)过程中的关键调控因子,Twist对肿瘤的侵袭和转移有重要影响。到目前为止,其促肿瘤作用报道多局限于实体瘤,与造血系统恶性肿瘤的关系尚不明确。我们首先采用Real-time PCR方法检测了Twistl mRNA在造血系统恶性肿瘤细胞系中的表达情况。在被检测的代表不同来源的11个造血系统恶性肿瘤细胞系中,K562和KG1a强表达Twist1,U937,Namalwa,以及HL60均为弱表达,CEM,NB4,Jurkat,Romas,HEL,J6-1均不表达;同时,我们还检测了115例白血病患者(106例初治患者,9例治疗后CR患者),13例ITP患者,6例MDS患者及3例正常人骨髓,3例正常人外周血中Twist1基因的表达情况。AML患者同ITP及正常人相比,Twist1表达明显升高(p＜0.05);CML患者同ITP及正常人相比,Twist1表达明显升高(p＜0.05);ALL患者同ITP患者相比,Twist1表达量没有明显变化(p＞0.05)。无论相对于正常人还是其他白血病类型,CML、AML-M2,AML-M5患者均显示出了明显的Twist1高表达趋势。Twist1在小于60岁的患者中高表达,而在60岁以上患者中表达量低。在我们检测的伴有t(8;21)的8例M2患者中,Twist中位表达水平0.121(0.021-0.592)反而较正常人表达水平有所降低0.2079(0.018-1.723)(p＞0.05),并显著低于AML-ETO阴性的M2患者0.596(0.03-23.804),(p＜0.05)。而在CML患者中,BCR/ABL阴性的患者表达水平0.298(0.039-20.757)低于BCR/ABL阳性患者表达水平中位数0.608(0.011-56.73),但是差异不显著(p＞0.05)。70例AML患者中,62例AML进展期患者表达中位数明显高于8例治疗后CR患者表达中位数,且差异具有统计学意义(p=0.00154)。在M3患者中,13例初治患者Twist1 mRNA表达中位数明显高于治疗后CR患者表达中位数,但没有明显统计学差异(p＞0.05)。AML治疗后CR患者与ITP及正常人表达量比较差异无统计学意义(p＞0.05)。CML、M2和M5型白血病中Twist基因表达的升高使得Twist成为白血病诊断指标成为可能,更加深入研究Twist在白血病发生中的作用将使我们更深刻的了解白血病发生的机制。2、我们同时选取了代表不同来源的2个细胞系:K562和KG1a,观察Twist1对造血系统恶性肿瘤的作用。设计并合成Twist1基因干扰片段shRNATwist1后,脂质体转染法及电转染法将构建的重组真核干扰载体分别转染K562和KG1a,Real-timePCR和Western Blot方法鉴定干扰效果。选取干扰片段表达阳性细胞株,通过生长曲线、细胞周期、集落形成实验来评价肿瘤细胞增殖、生长特性、集落形成能力,AnnexinV/7-AAD方法检测肿瘤细胞凋亡情况。结果发现,与转染空载体对照、阴性片段对照和未转染的K562细胞相比,瞬时转染Twist1干扰载体的k562细胞肿瘤生长状态、细胞增殖能力以及集落形成能力明显下降(p＜0.05);在电转染的另一个细胞系KG1a中,观察到同样的现象。瞬时转染Twist1干扰载体的K562细胞凋亡率明显高于转染空载体及阴性片段的对照组(p＜0.05)。在实体瘤中,Twist1有一个很重要的作用即促进上皮-间质转变(EMT),我们研究了在K562细胞中Twist1的促迁移作用,结果发现:转染了Twist1干扰载体的K562细胞迁移能力明显低于空载体和阴性对照组(p＜0.05)。裸鼠体内成瘤实验表明,转染了Twist1干扰载体的K562细胞肿瘤生长速度明显低于转染空载体和阴性片段对照载体的K562细胞组。(P＜0.01)。处死裸鼠后剥离的肿瘤称重,结果显示转染了Twist1干扰载体的K562细胞所形成的肿瘤重量明显小于于转染空载体及阴性片段对照载体的K562细胞组(P＜0.01及P＜0.01)。体内实验结果提示通过shRNA干扰掉Twist1的白血病细胞K562在裸鼠体内成瘤性降低。我们的工作首次证明,与实体瘤相似,干扰Twist1mRNA的表达亦可抑制造血系统恶性肿瘤的生长,迁移,有效促进其凋亡,其具体作用机制值得进一步探讨。