肝癌是严重损毁肝脏正常机能的疾病之一。据世界卫生组织国际癌症研究中心发布的《世界癌症报告2014》统计显示，现阶段我国肝癌新发病人数近40万，占全世界肝癌新发病人数的55％，在我国的肿瘤死亡率中列第二位。目前肝癌的发生发展机制研究取得了显著进展，研究表明肝癌包括启动、促进和发展等阶段，在此期间，遗传因素和外界环境因素的积聚变化导致损伤，炎症，脂肪变性，肝纤维化或肝硬化，最后转变成肝癌。　　要进一步研究肝癌不同发生发展阶段的分子机制，以及研发新的抗肿瘤药物和疗法，首先要建立与人类肝癌自然发生过程相似的动物模型。小鼠廉价、操作简单、肝癌发生过程与人类相似，是实验室广泛使用的模式动物。二乙基亚硝胺（DEN）是迄今应用最广泛的化学诱癌剂，且DEN混存于人们的日常食物中。传统小鼠肝癌模型多采用大剂量的DEN（50-100毫克每千克）和复杂的给药方式（每周2-5次DEN经口；腹腔注射；灌胃）长期给药。但此类造模方法小鼠顺应性差、个体差异大、实验周期长、且死亡率高。本实验室前期研究发现，改变给药方式（将 DEN溶于麻油中经口给药），长期低频给药能克服传统造模方式的不足，但实验周期仍然很长。　　随着纳米技术的快速发展，纳米载体（特别是纳米脂质体）由于其正面生物效应（纳米载药体系在癌症治疗方面具有靶向、缓释以及减少化疗药物副作用等优势），已被广泛应用于肿瘤治疗等医药领域。实验室前期合作研究表明，阿霉素姜黄素共输送脂质纳米载药系统能有效治疗原发性肝癌。但是，利用其负面生物效应在癌症造模领域的研究却未见报道，所以，我们反其道而行之，通过纳米化的“毒药”-脂质纳米材料包被二乙基亚硝胺（nanoDEN），成功高效的建立了小鼠肝癌模型，并对其致癌机制进行了初步研究。　　目的：　　制备稳定、高效的纳米化诱癌剂-nanoDEN，通过长期、低频经口给予纳米化诱癌剂建立良好、快捷、稳定的小鼠肝癌模型，研究其致癌机制。　　方法：　　1、采用高压均质法制备纳米化诱癌剂-nanoDEN，利用激光粒径仪测定其粒径、zeta电位及稳定性，采用扫描电镜观察其微观形态，通过透析袋法测定纳米化诱癌剂的体外释放，完成纳米化诱癌剂的制备与表征。　　2、在体的动物水平方面，经口给予16.5 mg/kg纳米化诱癌剂等诱发小鼠肝癌，通过记录小鼠体重变化、观察肝脏大体观（是否出现肿瘤结节）、检测肝功能生化指标（包括 ALT、AST等）和镜下对肝脏组织染色（H&E及 Masson）进行评分，比较纳米化诱癌剂与DEN致癌效果。　　3、分子水平方面，利用免疫组织染色法检测β-catenin（肿瘤发生过程中关键因子）、COX-2（炎症相关因子）、PCNA（与肿瘤发展密切相关的蛋白）的表达量变化情况及TUNEL染色法检测细胞凋亡的变化，分析纳米化诱癌剂的致癌作用。　　4、离体的细胞水平方面，采用MTT法检测纳米化诱癌剂及DEN对肝癌细胞株HepG-2、正常肝细胞株L02的毒性作用，比较纳米化诱癌剂与DEN的致癌能力。通过nanoRhod B处理HepG-2及L02细胞，模拟肝癌细胞及正常肝细胞对纳米化诱癌剂的胞吞作用过程。　　5、通过小鼠尾静脉注入nanoRhod B实验，模拟纳米化诱癌剂的体内分布情况。　　结果：　　1、纳米化诱癌剂的表征结果表明：纳米化诱癌剂具有稳定的粒径及电位，在电镜下表面平滑，粒径均一，能持续稳定释放。　　2、纳米化诱癌剂诱发小鼠肝癌的效果强于DEN：通过经口给予低频、微量纳米化诱癌剂成功建立了小鼠原发性肝癌模型。整个造模期间，nanoDEN组小鼠ALT、AST高于DEN组，nanoDEN组小鼠肝脏脂肪化、纤维化更严重，且20周时nanoDEN组小鼠体重呈下降趋势、出现肉眼可见肿瘤结节，表明纳米化诱癌剂的致癌效果优于DEN。　　3、在分子水平上，纳米化诱癌剂与 DEN致癌原理相似，相较而言纳米化诱癌剂致癌能力更强：肝组织的免疫组化研究结果表明，从β-catenin入核量和COX-2、PCNA的蛋白表达水平及肝细胞凋亡的变化趋势来看，纳米化诱癌剂和DEN在分子水平上的作用相似，但20周时，nanoDEN组小鼠肝组织PCNA表达量和细胞凋亡数量显著高于DEN组，表明纳米化诱癌剂的致癌能力更强。　　4、体外细胞实验表明，纳米化诱癌剂对正常肝细胞的杀伤作用明显强于肝癌细胞：纳米化诱癌剂对L02及HepG-2细胞生存抑制作用较DEN强，且纳米化诱癌剂更易在正常肝细胞中聚积，所以与肝癌细胞相比，纳米化诱癌剂对正常细胞抑制作用更强。　　5、纳米化诱癌剂具有肝脏靶向作用。　　结论：与DEN相比，纳米化诱癌剂具有靶向和缓释的优点，致癌性更强，可以减少DEN用量，缩短造模时间，是建立小鼠肝癌更好的诱癌剂。