旋毛虫是一种骨骼肌细胞内寄生的线虫,被感染的肌细胞会失去原有的组织特征,并转变成一种新的组织结构——保姆细胞(Nurse Cells,NC),旋毛虫的排泄分泌(ES)蛋白被认为参与了保姆细胞的形成过程,旋毛虫43ku ES抗原就是其中之一。本研究旨在利用实时荧光定量PCR技术建立旋毛虫43ku ES抗原基因(Ts43)和小鼠骨骼肌细胞调节因子MyoD、Id1基因表达量的测定方法。并用相应方法检测这些基因的表达动态,为深入探讨Ts43基因的表达水平与保姆细胞形成的关系奠定基础。根据GenBank中发表的旋毛虫的Ts43和18S rRNA基因序列,设计引物和探针。以管家基因18S rRNA为内参基因,对旋毛虫总RNA进行归一化处理,利用标准曲线法计算出Ts43基因的表达量。应用该方法检测旋毛虫不同寄生时期(包括成虫、新生蚴、成囊前期幼虫和肌幼虫)Ts43基因的表达动态变化。研究结果表明,旋毛虫在各寄生时期均有Ts43基因的表达,然而成虫和新生蚴Ts43基因的表达水平相对于其它寄生时期的虫体很低,该基因表达量在感染后18d开始逐渐上升,于感染后30d达到高峰,而后开始逐渐下降,但至感染后58d的虫体Ts43基因表达水平仍高于成虫和新生蚴。根据GenBank中发表的小鼠骨骼肌细胞调节因子MyoD、Id1和G3PDH基因序列,设计引物。以管家基因G3PDH为内参基因,对旋毛虫总RNA进行归一化处理,利用△Ct值法计算出MyoD和Id1基因的表达量。应用该方法检测旋毛虫不同寄生时期(感染后7d、14d、18d、22d、26d、30d、34d、38d、48d和58d)和小鼠活体转染Ts43基因前后小鼠骨骼肌细胞MyoD、Id1基因的表达动态变化。研究结果表明,小鼠骨骼肌细胞MyoD、Id1基因在开始感染旋毛虫后,基因表达量持续增加。MyoD基因表达量在感染后26d达到最高值,而Id1基因表达量在感染后22d达到最高值。之后,MyoD基因表达量持续下降,在感染后38d回到正常水平,而Id1基因表达量在达到最高值后迅速下降,在感染后26d时就回到正常水平。小鼠活体转染Ts43基因后会使MyoD和Id1基因的表达量均有增加,但增加的时间不同,MyoD基因在转染后2d表达量显著增加,而Id1基因在转染后6d时才有显著增加。保姆细胞的形成涉及到肌细胞去分化和再分化,而MyoD和Id1基因都是重要的肌细胞调节因子。本研究发现,在小鼠感染旋毛虫以后,小鼠骨骼肌细胞MyoD和Id1基因的表达量都发生了明显的变化。说明MyoD和Id1基因很可能在保姆细胞的形成过程中发挥了重要作用。而小鼠活体转染Ts43基因后会使MyoD和Id1基因的表达量均有增加,则进一步说明43ku ES抗原很可能通过改变细胞调节因子的转录来参与保姆细胞的形成。综上所述,Ts43基因与保姆细胞的形成有较大的关系,而且Ts43基因很可能是通过细胞调节因子来参与保姆细胞形成的。保姆细胞的形成涉及多个ES抗原蛋白和细胞调节因子,要想真正了解保姆细胞的形成机制,还需要对它们进行深入的研究。