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目的: 本研究旨在探究应用扶阳法防治急性肺损伤(Acute Lung Injury,ALI)的作用机制。首先通过临床试验来观察参附注射液对急性肺损伤的治疗作用,初探其可能的作用机理;进一步通过动物实验探究附子的主要成分次乌头碱作用于急性肺损伤的分子机制是否是通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)抑制高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放来实现的。 方法: 参附注射液治疗急性肺损伤的临床研究:选取辽宁中医药大学附属二院2015年1月1日-2017年1月1日期间住院的、符合中医阳虚证型的80例急性肺损伤患者随机分为参附注射液治疗组(n=40)、西医治疗对照组(n=40)。对照组:给予常规的西医内科治疗,包括抗感染、化痰、原发病治疗、呼吸支持治疗、稳定内环境、营养支持等;参附注射液治疗组:在西医治疗对照组治疗基础上,加用参附注射液静脉滴注:0.9%氯化钠注射液250ml或5%葡萄糖注射液250ml,加入参附注射液100ml,以40-60滴/分的速度静脉滴注,每天1次。疗程:1周。观察患者咳嗽、喘促气急、紫绀、湿啰音、呼吸频率等症状、体征,观察畏寒、肢冷、面足虚浮、大小便及舌脉等中医症状,记录有创呼吸机使用情况及是否发生急性呼吸窘迫综合征(Acute RespiratoryDistress Syndrome,ARDS),并采静脉血观察白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT),采动脉血进行血气分析检查氧分压(PaO2),记录吸氧浓度(FiO2)、计算氧合指数(PaO2/FiO2),并进行影像学检查(胸部X线检查或肺部CT检查)等,计算APACHEⅡ评分、Murray肺损伤评分,进行西医疗效判定、中医疗效判定。同时应用ELISA法检测血清中HMGB1含量。 次乌头碱调控PPAR-γ治疗内毒素致急性肺损伤机理探讨:96只健康SD大鼠雌雄各半,随机分成8组:对照组(n=12)、模型组(n=12)、地塞米松组(n=12)、次乌头碱低剂量组(LH组,n=12)、次乌头碱中剂量组(MH组,n=12)、次乌头碱高剂量组(HH组,n=12)、PPAR-γ抑制剂组(PI组,n=12)、PPAR-γ抑制剂加次乌头碱高剂量组(PI+HH组,n=12)。对照组:插管后动脉注射生理盐水1ml;模型组:插管后动脉注射内毒素(LPS)(15mg/kg);地塞米松组:在LPS损伤后动脉注射地塞米松(1.0ml/kg);次乌头碱低剂量组:在LPS损伤后动脉注射低剂量次乌头碱(5ml/kg);次乌头碱中剂量组:在LPS损伤后动脉注射中剂量次乌头碱(6ml/kg);次乌头碱高剂量组:在LPS损伤后动脉注射高剂量次乌头碱(7.5ml/kg);PPAR-γ抑制剂组:实验前12h腹腔注射T0070907(0.25mg/kg),12小时后动脉插管经颈动脉注射LPS(15mg/kg);PPAR-γ抑制剂加次乌头碱高剂量组:实验前12h腹腔注射T0070907(0.25mg/kg),在LPS损伤后动脉注射次乌头碱高剂量(7.5ml/kg)。取灌注肺组织并取血清,通过H&E法观察大鼠肺组织形态学改变,通过免疫组化法、Rt-PCR法、Western Blotting法检测PPAR-γ、HMGB1的表达,ELISA法检测HMGB1、TNF-α的表达,取血清检测LDH及WBC等炎症相关指标。 结果: 参附注射液治疗急性肺损伤的临床研究:参附注射液治疗组的APACHEⅡ评分及Murray评分的改善上优于西医治疗对照组:参附注射液治疗组的有创通气使用率及ARDS发生率要低于西医治疗对照组;在反应缺氧程度的氧合指数(PaO2/FiO2)、PaO2的改善上,参附注射液治疗组均优于西医治疗对照组;参附注射液治疗组在炎症相关指标WBC、CRP、PCT的改善上均优于西医治疗对照组;西医疗效上及中医疗效上,参附注射液治疗组的西医疗效判定及中医疗效判定均优于西医治疗对照组。 次乌头碱调控PPAR-γ治疗内毒素致急性肺损伤机理探讨:H&E结果显示在12h时,次乌头碱对急性肺损伤致肺部炎性浸润改善方面较地塞米松组具有优势,且呈剂量依赖性;免疫组化结果显示在6h和12h,次乌头碱随着剂量的增加,PPAR-γ表达更明显;Rt-PCR结果显示在24h时次乌头碱各剂量组PPAR-γ表达均明显高于地塞米松组;ELISA结果显示在24h时,次乌头碱表现出更好的抑制炎性因子TNF-α的作用;Western blotting结果提示在24h时,模型组及地塞米松组PPAR-γ表达均受到抑制,但高剂量次乌头碱可上调PPAR-γ表达;血清LDH含量测定结果提示在24h时,地塞米松及高剂量次乌头碱均能使炎症引起的LDH升高明显下降,中剂量次乌头碱亦有此作用,但不如高剂量次乌头碱明显;白细胞结果显示在24h时,地塞米松组与次乌头碱高剂量组的白细胞升高得到了抑制,次乌头碱中剂量组亦能抑制白细胞的升高,但是效果不如高剂量次乌头碱。免疫组化、Rt-PCR、ELISA及Western blotting结果均提示在次乌头碱激活PPAR-γ表达同时,对应的HMGB1的表达均得到抑制。 结论: 1.参附注射液联合西医常规治疗急性肺损伤疗效优于单纯西医常规治疗,其机制与抑制晚期炎症因子HMGB1的表达相关; 2.次乌头碱能减轻细胞炎症,防治急性肺损伤,其作用机制可能是通过激活PPAR-γ,抑制HMGB1信号传导来实现的。