响应面分析法优化提取葫芦巴的有效成分

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葫芦巴是一种在中国广泛种植的豆科植物,其成熟种子又称之为香豆子、苦豆等。中医常用来治疗肾脏虚冷、小腹冷痛、小肠疝气、寒湿脚气等病症。现代研究发现,葫芦巴种子有降血糖、降血脂、抗氧化、抗炎镇痛等药效,且葫芦巴种子中的甾体皂苷、多糖等化合物是主要的药效成分。因此探索有效提纯葫芦巴中的甾体皂苷和多糖成分的方法具有实际的经济价值。目前葫芦巴中的甾体皂苷提纯还没有快速有效的方法,本文采用亲水性双水相体系(乙醇/K2HPO4)提纯甾体总皂苷,并通过响应面分析法设计实验,考察各因素对甾体总皂苷提取率的影响。得到最佳条件:浸膏载样量为3.77%,K2HPO4质量浓度为25.06%,乙醇质量浓度为22.53%,最大提取率为97.93%。以上述最佳条件提取,重复6次,总皂苷提取率在98.30%±8.21%,相对误差小于10%,结果表明可通过亲水性双水相提纯葫芦巴中甾体总皂苷。研究表明,葫芦巴中甾体皂苷的主要母核薯蓣皂苷元是其药物活性中心,其含量的多少和药物的进一步开发有密切关系。因此我们建立了胶束毛细管电泳法检测薯蓣皂苷元。该方法较传统的液相色谱法具有操作简便、快速、灵敏等特点。粗提葫芦巴浸膏中薯蓣皂苷元的质量浓度为102.51mg/g,而浸膏经双水相提纯后,其中的薯蓣皂苷元的质量浓度为395.08mg/g,该结果表明亲水性双水相提取过程中起到了浓缩提纯的效果。据报道葫芦巴中的多糖提取多采用传统水提法,本文采用超声辅助提取,以水为溶剂提取粗多糖,通过响应面优化设计法考察提取条件对粗多糖提取率的影响,并最终得到最佳提取条件为提取温度80℃,料液比41ml/g,提取时间50min,预测最大提取率为4.98%。为了验证该结果的可靠性,重复最佳提取条件6次,得到最大提取率为4.96±0.12%,非常接近预测值,说明该优化结果可信度高,为工业化放大生产提供依据。
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