论文部分内容阅读
强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis，AS)是一种与人类白细胞相关抗原B27分子（HLA-B27）相关的炎症性的脊柱及关节病变，主要侵犯中轴关节，几乎全部累及骶髂关节和不同程度累及外周关节，炎症可侵犯滑膜关节、关节软骨以及肌腱、韧带和韧带附着点，常引起纤维性和骨性强直。中国人的发病率约为0.3%。AS病因及发病机制目前尚不明确,其发生可能与遗传、慢性炎症、自身免疫功能紊乱等因素有关。目前认为T淋巴细胞的功能失调在AS发病中起着核心作用,尤其是辅助性T细胞(Th细胞)，控制着其他淋巴细胞的活性及适应性免疫应答的诸多方面。研究指出miRNA在建立、维持淋巴细胞身份及免疫调控中起到至关重要的作用。目的：分析强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis，AS)患者外周血单个核细胞中（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC）中miRNA的表达情况，筛选与AS发病可能相关的miRNA，分析miRNA对靶基因的调控作用，明确信号通路，初步探讨miRNA在其发病机制中的作用。方法：我们分别取3例AS患者及健康对照的外周血，分离PBMC，提取miRNA，运用全基因组Solexa测序扫描，根据P<0.05差异达2倍以上为标准,分析两组miRNA的表达差异，同时在30例AS患者及30例健康对照中运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法对差异miRNA进行验证。所有AS患者诊断均符合美国风湿病学会（ACR）1984年修订的纽约标准，同时满足HLA-B27阳性、BASDAI>4的入组条件。结果：根据P<0.05差异达2倍以上为标准，正常对照与患者间共有11种已知的miRNA表达显著差异（p<0.001）：hsa-miR-1247-3p、hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-3168、hsa-miR-501-3p、hsa-miR-99a-5p、hsa-miR-1260a、hsa-miR-1268a、hsa-miR-1908、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-3614-5p和hsa-miR-548au-5。在30例AS患者及30例健康对照中对这11种差异miRNA进行实时定量PCR验证，结果发现这11种miRNA基因在患者中均表达下调。进行差异表达miRNA靶基因预测发现这些miRNA与ERAP1、STAT3、IGSF、IL17、IL2、IL22、IL23、IL24、IRAK、MAPK、TNF和TOLLIP具有相关性。结论：AS患者PBMC中的miRNA可能通过影响ERAP1、STAT3、IGSF、IL17、IL2、IL22、IL23、IL24、IRAK、MAPK、TNF和TOLLIP的表达从而参与AS的发病机制，同时通过测定miRNA的表达或许可以为临床上AS的早期诊断提供潜在的诊断标志物。