【背景及目的】　　背景：白藜芦醇（resveratrol，RES）化学名为反式-3,4’,5-三羟基-1,2-二苯乙烯（C14H12O3），在葡萄、蓝莓等植物中含量丰富，具有多种生物学作用，例如抗肿瘤、抗氧化等，能够抑制炎症、病毒感染、氧化压力、及血小板凝集等，最近对于它的抗癌作用研究的比较多。白藜芦醇可以抑制癌细胞的生长，这在体外培养细胞试验已经得到证实，但对于不同的肿瘤细胞其抗肿瘤机制是不一样的。目前已有文献报道白藜芦醇能够诱导人早幼粒白血病HL-60细胞的凋亡，能够将细胞周期阻滞在G1期，提高BAX/Bcl-2的比值，但其机制仍不清楚。本实验以HL-60细胞为材料，在前期研究的基础上，继续对RES对其诱导凋亡的机制进行研究。　　目的：研究RES诱导HL-60细胞凋亡机制的过程中，活性氧组份ROS（reactive oxygen species）在RES诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用，并分析RES慢性处理HL-60细胞，ROS所起的作用。　　【材料和方法】　　用25μM,50μM,100μM的RES分别处理处于对数期的HL-60细胞24 h，EMSA分别检测转录因子NFκB和AP-1的DNA结合活性；并通过western blot进一步确定各成分家族蛋白的表达变化；通过SOD gel分析MnSOD活性变化；采用活性氧的抑制剂NAC与RES协同作用，western blot检测相关通路蛋白的表达变化；并通过caspase-3活性检测试剂盒检测二者协同作用后caspase-3活性的变化。用5μM,10μM的RES分别处理处于对数期的HL-60细胞，通过MTT法检测1 d,2 d,3 d,4 d,5 d两个浓度对细胞凋亡的影响；caspase-3活性检测证明低浓度（5μM，10μM）作用长时间（5 d）后caspase-3活性的变化；通过SOD gel分析MnSOD活性变化；流式细胞术检测不同浓度、不同时间作用后过氧化氢（H2O2）、超氧阴离子（O2-）、线粒体膜电位（MMP）、细胞周期的相关变化；western blot确定相关通路蛋白的表达变化。　　【结果】　　1. MTT法检测，5μM，10μM RES分别作用HL-60细胞5 d后，细胞凋亡明显。5 mM，10 mM NAC分别与25μM,50μM,100μM的RES协同作用后，HL-60细胞的生存率有所提高，但随着RES浓度的增长，这种促进作用有所减弱。　　2.5 mM，10 mM NAC分别与25μM,50μM,100μM的RES协同作用后，caspase-3活性比各个浓度RES单独作用后caspase-3活性降低，Bcl2的表达略有升高，而BAX的表达量下降, BAX/Bcl2明显下降。而p-JNK变化不明显。其中5 mM NAC与RES协同作用比5 mM NAC caspase-3活性降低明显。　　3. EMSA的结果显示25μM,50μM,100μM的RES作用HL-60细胞24h后，转录因子NFκB和AP-1 DNA结合活性均降低。western blot的结果显示核内p65呈下降趋势，c-FOS表达抑制，而c-JUN的表达则受到激活。　　4.流式细胞术的结果显示RES慢性处理5 d，O2-的量逐渐增加，而MMP与H2O2的量则迅速下降，同时MnSOD的活性逐渐增强。25μM,50μM,100μM的RES作用HL-60细胞24 h后，O2-的量逐渐增加，但增加幅度减小，MnSOD活性变化不明显，但是蛋白表达量上升。　　5.5μM，10μM RES分别作用HL-60细胞5 d后，caspase-3活性检测的结果显示caspase-3活性增强。Western Blot检测说明Bcl2表达升高；BAX表达下降，p-JNK表达升高，BAX/Bcl2下降。　　【结论】　　1．RES能在一定浓度范围内在体外抑制HL-60细胞生长和增值，并且这种作用呈时间和剂量依赖关系。　　2．0～100μM RES能够降低NFκB和AP-1 DNA结合活性，与ROS的产生无关。　　3．0～100μM RES诱导HL-60细胞产生ROS，并且ROS具有促凋亡的作用，这与线粒体凋亡通路有关。　　4．慢性诱导HL-60细胞发生凋亡，机制与0～100μM RES不同，可能与其产生的ROS有关。　　【背景与目的】　　背景：二恶英，是有机化合物。它是一种在工业上没有用处的副产物，一般来说广义的“二恶英”一词泛指含有前述结构的衍生化合物，二恶英类化合物中，被认为毒性最强的是TCDD，因此大部分的动物实验研究皆使用TCDD做为检测二恶英类化合物毒性的标准，在自然环境中，二恶英最主要的来源是透过森林火灾而产生；亦有许多种透过人类活动产生的途径，像是火力发电、焚烧植物、聚氯乙烯（PVC）、垃圾焚化及吸烟等等一般人群通过呼吸途径暴露的二恶英量是很少的，在一些特殊情况下，经呼吸途径暴露的二恶英量也是不容忽视的。动物实验显示TCDD对某些种动物具有高度致癌性，但是要超过某一门槛剂量才会发生。对人类的致癌性目前尚在研究中，可能会增加多发性骨髓瘤与白血病的发生机率。　　目的：1.建立TCDD对鼠肺泡上皮细胞（LEC）诱导转化致癌的模型。2.探讨RES对TCDD对LEC致癌的抑制作用。　　【材料与方法】　　用MTT法检测二恶英对LEC增殖的促进作用。长时间低剂量的二恶英和白藜芦醇诱导转化LEC，镜下观察细胞形态的变化；明胶酶谱法检测其MMP-2与MMP-9的表达变化；荧光定量PCR（QRT-PCR）检测MMP-2与MMP-9mRNA水平的表达变化；双向电泳分析各处理组蛋白质组的差异点。　　【结果】　　1. MTT结果显示，0～20 nM/L TCDD可以提高LEC的生存率；　　2.明胶酶谱法显示，白藜芦醇在一定程度上能够有效的抑制二恶英诱导的MMP9的分泌；　　3.二恶英可促进LEC MMP9 mRNA的表达，但白藜芦醇可以降低二恶英诱导组MMP9 mRNA的表达。　　4.双向电泳的分析结果说明各处理组在蛋白水平上有较大差异。　　【结论】　　白藜芦醇能在一定程度上抑制二恶英对大鼠肺泡上皮细胞的毒性，这种作用于抑制细胞分泌MMP9有关。