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禽传染性支气管炎(Infectious Bronchitis，IB)是由传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitis Virus，IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病，给养鸡业造成巨大损失。IB传统疫苗包括灭活疫苗和减毒活疫苗，都有各自的不足。因而迫切需要研制一种高效新型的疫苗来预防IB。本研究旨在应用杆状病毒表达系统，分别构建一株表面展示IBV M41株的S1蛋白的杆状病毒载体疫苗及一株双表达IBV M41株的S1蛋白的杆状病毒载体疫苗。前一株疫苗可以在杆状病毒表面展示IBV M41株的S1蛋白，免疫动物发挥亚单位疫苗的作用；后一株疫苗不但可以在杆状病毒表面展示IBV M41株的S1蛋白，而且其所携带的S1基因可以通过转导的作用，在动物细胞内表达，即该疫苗能同时发挥亚单位疫苗及DNA疫苗的作用。 本研究应用RT-PCR方法获得了IBV M41株的S1基因，将其亚克隆到表面展示质粒pBACsurf-1，获得重组质粒psurf-S1；设计引物扩增重组质粒psurf-S1的gp64-S1片段，亚克隆到质粒pcDNA3.1(+)，得到重组质粒pCMV-surf-S1；分别设计引物扩增重组质粒pCMV-surf-S1的CMV-gp64-S1片段及重组质粒psurf-S1的gp64-S1片段，亚克隆到杆状病毒转移质粒pFastBacTM Dual。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统和脂质体法转染sf9细胞，分别获得重组杆状病毒BV-CMV-S1和BV-S1。间接免疫荧光试验、Western-blotting结果表明，重组杆状病毒BV-CMV-S1和BV-S1可以在感染sf9细胞中表达S1蛋白，并在细胞膜及病毒表面展示S1蛋白；BV-CMV-S1可以在转导的PK-15细胞中表达S1蛋白。将构建的重组杆状病毒BV-CMV-S1和BV-S1以0.2mL/只(1010pfu/mL)的剂量腿部肌肉注射7日龄SPF雏鸡，21日龄加强免疫一次，一免前及一免后7、14、21、28d采血检测ELISA抗体效价和外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的百分比含量。二免后两周用IBV M41株进行攻毒保护试验。同时设携带S1基因并能转导动物细胞从而表达S1蛋白的重组杆状病毒组(Ac-V-S1组)，商品化灭活疫苗对照组，杆状病毒野毒对照组和PBS对照组。试验结果表明，在体液免疫方面，灭活疫苗组诱导的IBV特异性的ELISA抗体水平最高，显著高于其它试验组(P<0.05)，BV-CMV-S1组次之；但在细胞免疫水平方面，BV-CMV-S1组表现出较强的优势，免疫水平显著的高于其它免疫组(P<0.05)，其次是BV-S1组和Ac-V-S1组；攻毒结果表明，BV-CMV-S1，BV-S1和Ac-V-S1组的保护率分别为67％(10/15)，53%(8/15)，53%(8/15)，低于常规灭活疫苗80%(12/15)。表明杆状病毒双表达系统能提高重组杆状病毒的免疫原性，重组杆状病毒在诱导细胞免疫水平方面具有较强的优势，可以弥补其在体液免疫方面的不足，提高重组杆状病毒的免疫效果。