PHA生产菌株的选育及其混合发酵条件的优化

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聚羟基脂肪酸酯(Polyhydroxyalkanoates,PHA)是由多种细菌合成的可完全生物降解的胞内聚酯,其研究对于环境保护以及资源的可持续利用具有重要的意义。本论文从自然界筛选获得2株具有PHA合成能力的菌株,利用响应面分析法优化了混菌发酵工艺,并对发酵产物的物化性能进行了表征和分析,结果如下:(1)从新疆12个采样点中筛选获得了2株PHA积累能力较高的菌株,通过形态、生理生化和16S rDNA等方法对其进行鉴定,分别命名为Burkholderia cepacia WN-H41和Bacillus sp.1175,并且利用平板对峙法证实两种细菌可共生。(2)以2种目的菌株为研究对象,对PHA混合发酵过程进行了初步优化。通过单因素实验考察了种龄、接种比例、发酵周期、碳源、氮源等条件对PHA发酵的影响;Plackett-burman设计实验结果显示蛋白胨、MgSO4·7H2O和可溶性淀粉的浓度对PHA产量贡献较大。Box-Benhnken Design实验结果表明在蛋白胨17g/L,MgSO4·7H2O0.4g/L,可溶性淀粉39g/L的优化条件下实际PHA产量为7.668g/L,与理论值7.780g/L相近,较最佳单因素条件产量提高了2.15倍。(3)对单菌和混合发酵产物的结构、分子量、热性能和拉伸性能进行了分析比较,结果表明:3种发酵产物均为聚羟基丁酸(PHB),相比于单菌发酵,混合发酵合成PHB的平均分子量明显增大(Mn=11.2×104),分子量分布更窄(PDI=1.16)。不同发酵方式生产的PHB的热性能无明显差异,并且拉伸强度和分子量大小呈正相关性。(4)通过物理及化学诱变对B. cepacia WN-H41进行了高产菌株选育,最终获得了一株PHB产量较出发菌株提高了54.75%且遗传稳定的突变株—EMS-40-3。
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