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背景胰腺癌(pancreatic cancer,PC)的发病率近年来在国内外均有增高趋势。胰腺癌发病隐匿且缺乏早期诊断标志物,病人就诊时往往处于晚期,目前治疗效果欠佳,其5年生存率低于5%。因此,寻找具有早期诊断价值的肿瘤标志物和分子治疗靶点显得尤为必要。本文探讨MicroRNA(miRNA)在胰腺癌中的异常表达。目的比较胰腺癌病人的肿瘤组织和正常胰腺组织的miRNA表达谱。初步筛选出在胰腺癌组织中表达明显异常的miRNA分子,挑选其中上调的2个miRNA即miR-10b和miR-21进行RT-PCR验证。miRNA在胰腺癌中独特的异常表达模式可能为肿瘤诊断、明确高风险与低风险人群、疾病预后、癌症预防和预测治疗反应提供有价值的信息。方法1.利用miRNA芯片技术比较胰腺癌组织,胰腺癌细胞株ASPC-l和正常胰腺组织的miRNA表达差异。利用TRIzol(?)Reagent抽提分离总RNA,与Exiqon miRNA基因芯片杂交,采用Axon GenePix 4000B microarray scanner扫描仪进行芯片扫描获得图像,使用GenePix pro V6.0软件提取数据后进行数据分析。2.根据表达谱结果,挑选差异表达的miRNA中的两个miRNA(miR-10b、miR-21)采用Real—time RT—PCR法(SYBR GREEN法)检测上述胰腺癌组织和正常胰腺组织中miR-10b和miR-21的表达情况,进一步验证miRNA基因芯片的结果。miRNA的PT-PCR方法参照Invitrogen-NCode(?) EXPRESS SYBR(?) GreenER(?) miRNA qRT-PCR Kit Universal中的操作步骤进行。采用U6 RNA作为内标,进行归一化。结果运用LightCycler480 1.5.0软件分析。结果1.利用miRNA芯片技术,在胰腺癌组织和细胞株中,共检测了1700个以上的microRNAs分子(芯片包含所有有机体和病毒microRNAs探针)。发现其中有354个miRNAs分子表达升高,306个miRNAs分子表达降低。2.miRNA定量PCR扩增曲线和融解曲线,显示融解曲线均为单一峰,说明PCR扩增特异性较好。以正常胰腺组织为对照,8例胰腺癌组织和相应癌旁正常胰腺组织中miR-10b的相对表达量分别为(0.0743±0.0222)和(0.0287±0.0129),在癌组织与正常胰腺组织中表达有显著差异(P<O.05);miR-21在癌组织与正常胰腺组织中的相对表达量分别为(0.3062±0.1117)和(0.0240±0.0137),有显著差异(P<O.05)。结论l.胰腺癌组织和细胞株中,均存在大量异常表达的miRNAs分子。2.将芯片结果与荧光定量RT-PCR结果进行比较,结果显示miR- 10b和miR-21在胰腺癌组织中表达均上调,miRNA芯片与定量RT-PCR的结果一致,说明本研究芯片结果真实可靠。miR- 10b和miR-21可能在胰腺癌的发生发展中发挥着类似癌基因的作用,通过胰腺癌中microRNA表达初步研究,为进一步实验打下基础。