藏药旺拉是一种传统藏药,为兰科植物凹舌兰(Coeotgolssum viride (L.) Hartm. var. barctaetum (Wild.) Rihcter)的干燥块茎,具有补气益血、生津止渴、安神增智等功效,药理研究显示旺拉提取物CE可以有效改善痴呆小鼠、亚急性衰老小鼠的学习记忆能力。本研究采用大鼠乳鼠前额叶神经元体外培养的方法,观察藏药旺拉提取物CE对Aβ25-35介导的大鼠乳鼠神经元毒性损伤的作用,采用免疫组织化学方法鉴定了培养的大鼠乳鼠前额叶神经细胞纯度；采用MTT方法测定了培养的大鼠乳鼠前额叶神经细胞活性；采用TUNEL法检测了培养的大鼠乳鼠前额叶神经细胞凋亡情况；采用免疫组织化学方法检测了培养的大鼠乳鼠前额叶神经细胞中微管蛋白β-tubulin III蛋白的形态结构及表达。为进一步研究藏药旺拉提取物CE对神经元的保护作用及作用机制提供了新的资料。主要结论归纳如下：1.对培养第5天的大鼠乳鼠前额叶神经元进行p-tubulin III和DAPI免疫组织化学染色,β-tubulinⅢ性染色为绿色细胞突起,能较好地显示细胞的形态,DAPI日性染色细胞核为蓝色,实验结果显示培养出良好的前额叶神经元,且纯度>95%。2.MTT法和TUNEL法检测细胞的凋亡,发现在培养的大鼠乳鼠前额叶神经元中加入20μmol/L的Aβ25-35处理24小时对神经细胞有明显的神经毒性,包括细胞活力的下降、细胞凋亡率的增加。3.MTT法和TUNEL法检测发现,在培养的大鼠乳鼠前额叶神经元中用CE预处理后加入Aβ25-35处理能够抑制Aβ25-35产生的神经毒性,且不同浓度CE(0.1mg/mL、1mg/mL、10mg/mL)对Ap25-35介导的大鼠乳鼠神经元毒性损伤的作用结果表明CE对Aβ25-35介导的大鼠乳鼠神经元损伤细胞活性具有保护作用存在一定的剂量依赖性。4·免疫组织化学的方法检测神经元的特异性标记物β-tubulinⅢ,发现Aβ25-35处理前额叶神经元后,β-tubulin Ⅲ的染色明显减少,CE提取物可部分恢复β-tubulin ⅡI的染色。