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杀菌/渗透-增强蛋白(bactericidal/permeability-increasting protein,BPI)是正常存在于人和其它哺乳动物多形核白细胞中的一种阳离子抗菌蛋白.该种天然抗菌蛋白可选择性杀伤革兰氏阴性细菌(gram-negative bacteria,GNB)并能有效中和细菌内毒素(lipopolysaccharide,LPS).重且BPI(rBPI<,55>)及其功能性氨基端片段(rBPI<,23>)具有与天然BPI完全相同的抗菌活性,它们对人或动物无免疫原性,对真核细胞无毒性作用,且与某些抗生素有协同作用,因此具有良好的临床应用前景.最近,XOMA公司研制出rBPI<,21>,并已将共用于临床GNB感染的治疗.国内有关rBPI及其功能性氨基端片段的研究报道很少.根据国外有关方面的研究状况,研究人员选择rBPI<,21>为研究目标,主要进行了如下研究工作:(1)根据已编码BPI氨基端193个氨基酸的cDNA序列,设计合成了一对与之相匹配的带有EcoRI和BamHI酶切位点的引物;(2)采用RT-PCR技术,以HL-60细胞mRNA为模板扩增获得编码BPI氨基端193个氨基酸(rBPI<,21>)的cDNA片段(BPI600bp),再经EcoRI、BamHI双酶切获得BPI200bp和BPI400bp两个cDNA片段;(3)选择pUC18质粒为克隆(测序)载体,酶切后通过连接反应分别与BPI400bp和BPI200bp片段连接获得pUC18-BPI400和pUC18-BPI200重组质粒.对目的基因进行cDNA序列分析,结果表明BPI600bp基因序列与文献报道一致;(4)选择pBV220质粒为表达载体,酶切后通过连接反应先与BPI400bp,再与BP1200bp片段连接获得pBV220-BPI600重组表达质粒,转化感受态细胞E.coil DH5α;(5)诱导重组蛋白(rBPI<,2>)表达,提取包涵体,经SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定证实,表达蛋白是外源基因(BIP600bp)编码的产物.ppp