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目的:1.探讨幽门螺杆(Hp)在胃癌恶化进程中的作用及机制。首先,明确Hp感染的胃癌细胞株来源的外泌体中Met蛋白的表达情况,并探讨外泌体中Met蛋白对胃癌细胞的增殖侵袭作用及可能的分子机制。2.收集胃癌患者和健康对照组血浆,检测血浆外泌体中Met蛋白的表达情况,分析血浆外泌体Met蛋白的表达与是否存在胃癌、是否存在的Hp感染、胃癌的临床分期、是否发生淋巴结转移的关系,并为探索新的胃癌诊断分子标志物提供线索和思路。方法:1.western blot的方法检测Met蛋白在正常胃上皮细胞株GES1,以及5种胃癌细胞株(AGS、SGC-7901、MGC-803、HGC-27 和 BGC-823)的表达情况;利用 Hp 和 AGS 进行共培养 3h、6h、12h 和 24h,western blot 和 qRT-PCR检测AGS细胞的Met蛋白及mRNA的表达情况。2.收集AGS细胞上清,进行外泌体提取和透射电镜的鉴定;Hp和AGS进行共培养后,qRT-PCR检测AGS中外泌体分泌相关基因(RAB1A,RAB5A,RAB7,RAB27A和RAB27B)的表达情况。3.提取AGS细胞及Hp感染的AGS细胞的上清的外泌体,Western blot检测外泌体中Met蛋白的表达情况;分别利用Met的全长抗体、胞内端抗体和胞外端抗体检测检测Hp感染的AGS细胞和外泌体内的Met蛋白表达情况;Western blot检测Hp感染的AGS细胞的外泌体内和细胞上清内的Met表达差异。4.检测外泌体内Met蛋白的对于AGS细胞增殖和侵袭能力的影响。分别利用CCK-8和侵袭实验检测不同外泌体(PBS、AGS Exos、Hp-AGS Exos;Hp-AGSshCtrl Exos、Hp-AGSshMet1 Exos、Hp-AGSshMet2 Exos)(200ug/ml)处理后的AGS细胞增殖和侵袭情况。5.探讨外泌体内Met蛋白对AGS细胞增殖侵袭可能的分子机制,Western blot检测不同外泌体(PBS、AGS Exos、Hp-AGS Exos;Hp-AGSshCtrl Exos、Hp-AGSshMet1 Exos、Hp-AGSshMet2 Exos)(200ug/ml)处理后的 AGS 细胞的肿瘤相关蛋白 EGFR、STAT3、p-STAT3、MAPKAPK2、P-MAPKAPK2、ERK1/2、p-ERK1/2 表达情况。6.收集胃癌患者及健康对照组患者的血浆标本,分别检测有无Hp感染的胃癌患者、不同TNM分期的胃癌患者、有无淋巴结转移的胃癌患者的血浆样本中外泌体的Met蛋白表达情况。结果:1.Met蛋白在胃上皮细胞株GES1和5种胃癌细胞株(AGS、SGC-7901、MGC-803、HGC-27和BGC-823)表达量各不相同,其中AGS细胞中Met蛋白表达量最高,Hp和AGS共培养12h和24h,可引起AGS中的Met蛋白表达量显著下调。2.AGS细胞内的促进外泌体分泌的R4B相关基因R4B14、RAB7、RAB27A和RAB27B在Hp处理后表达量上升,抑制外泌体分泌R4B相关基因RAB5在Hp处理后表达下降。3.AGS细胞经Hp处理后促进含有C端Met蛋白剪切体的外泌体分泌,同时促进胞外端Met蛋白的脱落。4.外泌体内的C端Met蛋白剪切体可以促进AGS细胞的增殖和侵袭。5.外泌体内的C端Met蛋白剪切体可以上调AGS中的EGFR的表达,促进AGS细胞的MAPKAPK2和ERK1/2信号的磷酸化。6.患者血浆外泌体内的C端Met蛋白剪切体具有诊断意义,可以作为胃癌是否有无胃癌、有无淋巴结转移的分子标志物。结论:总之,我们的实验发现Hp感染可以促进AGS细胞分泌含有C端Met蛋白剪切体外泌体,且外泌体C端Met蛋白剪切体可以促进AGS细胞的增殖和迁移。人体血浆外泌体C端Met蛋白剪切体可能成为胃癌早期诊断和淋巴结转移的分子标志物。