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阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)的主要临床特征为进行性认知功能下降,通常最初为近期记忆丢失,随后影响到所有智力功能,严重者可导致生活基本功能完全丧失和过早死亡。细胞外β淀粉样蛋白(βamyloid protein,Aβ)沉积、细胞内神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)和引起神经元死亡的炎性反应是AD的主要病理特征。由于老龄化危机,AD的患病率在全世界范围内都将增加,并将对社会产生沉重的经济负担。神经元功能障碍和死亡是AD出现一系列症状的原因,然而现有的药物治疗措施并不能减缓或阻止这一病理改变,AD仍是一种不可治愈的疾病。因此,探索一种经济有效的防治药物具有重要意义。AD的发生发展与神经系统炎性反应密切相关。炎性因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)均具有神经毒性作用,可影响神经突触的传递功能。TNF-α和IL-1β也是核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)最有效的刺激因子。激活的NF-κB可继续诱导TNF-α、IL-1β、Toll样受体和脂多糖等细胞因子表达,形成慢性炎性反应的恶性循环。临床资料显示,服用阿司匹林(aspirin,Asp)的人群AD患病率较未服用者明显减少。鉴于Asp具有抗炎作用,推测其降低AD的发生风险可能与抗炎作用有关。本研究使用Aβ制造AD神经损伤模型,通过ASP的干预来探究其对神经炎性反应中TNF-α和IL-1β含量以及NF-κB/p65和磷酸化核因子κB抑制蛋白α(phosphorylated inhibitor proteinαof nuclear factor kappa B,p IκB-α)表达的影响及其作用机制,以期能为AD的治疗提供新方法。研究目的神经系统炎性反应在AD的进程中起到重要作用,本研究通过使用Aβ来建立AD神经损伤细胞模型,在Asp干预后观察其对神经炎性反应中TNF-α和IL-1β含量以及NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α总蛋白表达的影响,探讨NF-κB通路在此过程中的作用和Asp在AD临床治疗中的意义。研究方法(1)取孕17~18d胎鼠海马,经过剪碎、消化、离心和吹打过滤后接种培养;(2)观察并记录第2、3、4、5天神经元生长状况,并于第7天用神经元特异性烯醇化酶荧光染色法鉴定神经元,计算其纯度。(3)将培养至第7天的神经元随机分为4组:(1)Aβ组:加入终浓度为20μmol/L的Aβ;(2)低剂量Asp组:加入终浓度为50μmol/L的Asp和20μmol/L的Aβ;(3)高剂量Asp组:加入终浓度为100μmol/L的Asp和20μmol/L的Aβ;(4)空白对照组:加入等量维持培养基。继续培养48h后,采用双抗体夹心ELISA法测定上清液中TNF-α和IL-1β含量,Wstern Blotting法检测NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α总蛋白表达水平。结果(1)与对照组比较,Aβ组TNF-α和IL-1β含量最高(P<0.01),其次为低剂量Asp组(P<0.01)和高剂量Asp组(P=0.02和P<0.01);Aβ组NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α总蛋白的表达水平也明显升高(P<0.01),低剂量Asp组NF-κB/p65核蛋白表达水平稍有升高(P=0.01),p IκB-α总蛋白表达水平比较无统计学差异(P=0.61);高剂量Asp组NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α总蛋白表达水平均无统计学差异(P值分别为0.13和0.77)。(2)与Aβ组比较,低剂量Asp组TNF-α和IL-1β含量均降低(P<0.01),NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α总蛋白表达水平也明显降低(P<0.01);高剂量Asp组TNF-α和IL-1β含量也明显降低(P<0.01),并减少NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α总蛋白表达水平(P<0.01)。(3)低剂量和高剂量Asp组两组TNF-α和IL-1β含量以及NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α总蛋白表达水平比较均无统计学差异(P值分别为0.36、0.58、0.19和0.82)。结论Aβ组TNF-α和IL-1β含量均明显升高,NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α总蛋白表达水平也明显升高,提示Aβ组炎性反应较为明显,且NF-κB被激活并进入核内;低剂量和高剂量Asp组TNF-α和IL-1β含量均降低,NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α总蛋白表达水平也偏低,提示低剂量和高剂量Asp组炎性反应受到抑制,且NF-κB的激活受到抑制。推测Aβ可能通过神经元中激活NF-κB通路而诱导炎性因子TNF-α和IL-1β的释放增多,Asp可能通过抑制神经元中NF-κB的活化,减少TNF-α和IL-1β的生成,从而对神经炎性损伤起到保护作用。提示炎性反应在AD发生发展中具有不可忽视的作用,以及AD抗炎治疗的可能性。高剂量和低剂量Asp组两组相比较无统计学差异,若进行动物实验,为了避免高剂量Asp产生的胃肠道副作用,建议从低剂量Asp开始使用。