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材料与方法一、患者收集1998年2月至2002年5月在中国医科大学附属第一医院手术切除的95例原发性非小细胞肺癌组织和20例正常肺组织蜡块。患者生存时间的计算为从手术日期开始到由于复发/转移而死亡的日期或随访截止日期为止,其中男性72例,女性23例,中位年龄58岁（33岁-76岁）。根据International Union Against Cancer（2002）TNM分期标准,Ⅰ期40例,Ⅱ期18例,Ⅲ期35例,Ⅳ期2例;鳞癌45例,腺癌40例,其它病理类型10例;高分化29例,中分化24例,低分化42例。这些患者术前均未接受放疗及化疗。二、免疫组织化学染色及TUNEL法采用S-P法对非小细胞肺癌组织及正常肺组织进行免疫组织化学染色,检测非小细胞肺癌组织及正常肺组织中Axin、p53表达情况。采用TUNEL（Terminaldeoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling）检测非小细胞肺癌组织及正常肺组织中细胞凋亡情况。所有切片由两位有经验的病理研究者在不知道临床参数的情况下独立阅片并计数细胞。每张切片在400倍显微镜下计数5个不同视野中100个细胞中的阳性细胞数并计算Axin、p53的平均阳性细胞率及凋亡指数（Apoptosis Index,AI）。参考Xu等标准:Axin阳性细胞率＜40%为阴性,≥40%为阳性。参考Rusch等标准:p53阳性细胞率＜5%为阴性,≥5%为阳性。三、X线照射肺癌组织将手术切除的新鲜的非小细胞肺癌组织迅速切成4mm×4mm×1mm大小的组织块,迅速放入37℃DMEM无菌培养基中,经电子直线加速器产生的6MeV-X射线（剂量率为2Gy/min,剂量为1Gy,源瘤距为100cm,照射野涵盖全部癌组织）照射,然后在37℃5%CO2培养箱内继续培养5小时后取出,PBS洗涤。一部分组织用于提取蛋白和总RNA,用以检测Axin蛋白表达、mRNA表达及caspase-3活化情况;另一部分组织经10%中性福尔马林固定24小时后制成4μm切片,做免疫组织化学染色以检测Axin蛋白表达情况。以同一病例未经X射线照射的非小细胞肺癌组织作为对照。四、细胞培养、质粒构建、转染及X线照射使用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基在含5%CO2的37℃培养箱内培养A549细胞（p53为野生型）;使用使用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基在含5%CO2的37℃培养箱内培养BE1细胞（p53为突变型）。向A549细胞和BE1细胞中转染Axin和AxinΔp53ΔHIPK2（不能与p53结合的Axin）。转染后,分别向细胞培养液中加入p53抑制剂PFT-α和JNK抑制剂SP600125,X射线照射后经AnnexinV-FITC/PI染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡。以未经X射线照射的细胞及转染空质粒的细胞作为对照。五、免疫印迹和RT-PCR用Western blot和RT-PCR方法检测经X射线照射后非小细胞肺癌组织和A549细胞、BE1细胞中Axin蛋白、mRNA的变化以及凋亡蛋白caspase-3的活化情况。以未经X射线照射的组织和细胞作为对照。六、免疫荧光用免疫荧光方法检测经X射线照射后A549细胞和BE1细胞磷酸化JNK表达情况。以未经X射线照射的A549细胞和BE1细胞作为对照。结果1、实验发现:Axin在非小细胞肺癌组织中的阳性率为45.26%（43/95）,明显低于正常肺组织。Axin的表达与非小细胞肺癌的分化正相关（P=0.012）,与非小细胞肺癌TNM分期及淋巴结转移相关（P＜0.05）,与p53（mt）的表达负相关（P=0.000）,与细胞凋亡正相关（P=0.002）。Axin高表达的患者预后明显好于低表达的患者。2、X射线可以诱导大部分（8/15）手术切除的非小细胞肺癌组织Axin表达增加,Axin表达增加的非小细胞肺癌组织中caspase-3活化明显高于Axin表达未增加者（P＜0.05）。3、Axin与X射线均有诱导A549细胞和BE1细胞凋亡的作用,但X射线能使高表达Axin的癌细胞凋亡率明显增加,但这一作用可被p53或JNK抑制剂明显阻断。结论1、Axin与非小细胞肺癌凋亡正相关,其高表达者预后明显好于低表达者。2、X射线照射可诱导部分非小细胞肺癌Axin的表达上调,并促进高表达Axin的肺癌细胞发生凋亡,其机制主要是通过p53和JNK途径实现。X射线照射后Axin表达增加很可能是判定非小细胞肺癌对X射线敏感的重要参考指标。