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目的：本课题旨在通过研究食管胃结合部(Gastroesophageal Junction)癌前病变及早期癌中HINT1基因启动子区CpG岛甲基化状态与蛋白表达情况，探讨HINT1基因启动子区CpG岛甲基化与食管胃结合部癌变的关系，结合其体内外发病的各种危险因素，进一步探讨食管胃结合部肿瘤发生的病因学及分子学机制。方法：根据Siewert分型，TypeⅠ型即食管远端，包括31例Barrett食管(BE)、16例食管远端高级别上皮内瘤变及早期癌(esophageal high-gradeintraepithelial neoplasia and early cancer,EHIN and EEC)、18例食管腺癌(esophageal adenocarcinoma,EA)；TypeⅡ型即贲门部，包括23例贲门低级别上皮内瘤变(cardia low-grade intraepithelial neoplasia,CLIN)、30例贲门高级别上皮内瘤变及早期癌(cardia high-grade intraepithelial neoplasia andearly cancer,CHIN and CEC)、36例贲门癌(cardia adenocarcinoma,CA)；TypeⅢ型即近端胃，包括14例近端胃低级别上皮内瘤变(subcardial gastriclow-grade intraepithelial neoplasia,SGLIN)、12例近端胃高级别上皮内瘤变及早期癌(subcardial gastric high-grade intraepithelial neoplasia and earlycancer, SGHIN and SGEC)、4例近端胃癌(subcardial gastricadenocarcinoma,SGA)；及正常对照组45例。所有病例均记录个体一般情况、家族史、吸烟饮酒史。活检组织均经内镜直视下活检取得，由经验丰富的病理医师通过组织病理学确诊。活检组织幽门螺杆菌(helicobacterpylori，Hp)感染情况均通过快速尿素酶实验(RUT)检测。采用甲基化特异性PCR检测食管胃结合部组织中HINT1基因启动子区CpG岛甲基化状态，采用免疫组化SP法检测相应蜡块组织中HINT1蛋白表达情况。所有的数据均采用SPSS13.0软件进行统计学分析，检验水准α=0.05。结果：1食管胃结合部组织HINT1基因启动子区甲基化状态及相关危险因素的分析1.1TypeⅠ型HINT1基因启动子区甲基化状态及相关危险因素EHIN及EEC组、EA组、BE组与对照组间甲基化发生率分别为43.8%(7/16)、50%(9/18)、12.9%(4/31)、0%(0/15)， EHIN及EEC组与EA组比较无显著差别(P=0.716)；与对照组、BE组比较有显著差异(P=0.007，P=0.029)；BE组与对照组比较无显著差异(P=0.288)。将EHIN及EEC组与BE组合并后，合并组HINT1基因甲基化率显著低于EA组(P=0.038)，与正常组比较无显著差别(P=0.052)。Hp感染率为47.7%，其中Hp感染阳性组甲基化率为35.5%(11/31)， Hp感染阴性组甲基化率为29.4%(10/34)，两者比较无显著差异(P=0.601)。HINT1基因启动子区甲基化与性别、吸烟及饮酒有关(P=0.039，P=0.009，P=0.006)，吸烟和饮酒可以显著增加食管远端组织HINT1基因甲基化发生率(R=0.356，R=0.327)，男性与食管远端组织HINT1甲基化发生率无明显相关性(R=0.123，P＞0.05)。1.2TypeⅡ型HINT1基因启动子区甲基化状态及相关危险因素CHIN及CEC组、CA组、CLIN组及对照组甲基化率分别为53.3%(16/30)、55.6%(20/36)、34.8%(8/23)、6.7%(1/15)；CHIN及CEC组、CA组、CLIN组比较，差异无统计学意义(P=0.260)；与对照组甲基化率比较，有显著差异(P=0.002)；CLIN组与对照组比较，差异无统计学意义(P=0.061)。将CHIN及CEC组与CLIN组合并后，合并组HINT1基因甲基化率较正常组显著升高(P=0.006)，与CA组比较无显著差异(P=0.341)。 Hp感染率为66.3%，其中Hp感染阳性组甲基化率为49.2%(29/59)，Hp感染阴性组甲基化率为50.0%(15/30)，两者比较无显著差异(P=0.940)。HINT1基因启动子区甲基化与年龄、性别、烟酒史、家族史均无关(P＞0.05)。1.3TypeⅢ型HINT1基因启动子区甲基化状态及相关危险因素SGHIN及SGEC组、SGA组、SGLIN组与对照组甲基化率分别为66.7%(8/12)、75%(3/4)、21.4%(3/14)、6.7%(1/15)，近端胃SGHIN及SGEC组与SGLIN组、对照组比较均有显著差异(P=0.045，P=0.003)；SGLIN组与对照组比较，无显著差异(P=0.330)。由于SGA组样本数较小，故在此不做比较。将SGHIN及SGEC组与SGLIN组合并后，合并组HINT1基因甲基化率较正常组显著升高(P=0.030)。Hp感染率为70.0%，其中Hp感染阳性组甲基化率为57.1%(12/21)，Hp感染阴性组甲基化率为22.2%(2/9)，两者比较无显著差异(P=0.940)。HINT1基因启动子区甲基化与年龄、性别、烟酒史、家族史均无关(P＞0.05)。2食管胃结合部组织HINT1蛋白表达情况分析2.1TypeⅠ型HINT1蛋白表达情况EHIN及EEC组、EA组、BE组与对照组间蛋白表达率分别为25.0%(4/16)、33.3%(6/18)、61.3%(19/31)、73.3%(11/15)， EHIN及EEC与EA组比较无显著差异(P=0.715)。EHIN及EEC与对照组、BE组比较均具有显著差异(P=0.012，P=0.018)；BE组与正常组比较差异无统计学意义(P=0.421)。将EHIN及EEC组与BE组合并，合并组HINT1蛋白表达率与EA组、正常组比较均无显著差异(P=0.251，P=0.098)。2.2TypeⅡ型HINT1蛋白表达情况CHIN及CEC组、CA组、CLIN组及对照组蛋白表达率分别为23.1%(6/26)、27.3%(6/22)、60.9%(14/23)、60.0%(9/15)；CHIN及CEC组、CA组比较，差异无统计学意义(P=0.738)；CHIN及CEC组与对照组、CLIN组比较，有显著差异(P=0.018，P=0.007)；CLIN组、对照组比较，差异无统计学意义(P=0.957)。将CHIN及CEC组、CLIN组合并，合并组HINT1蛋白表达率与CA组、正常组比较无显著差异(P=0.192，P=0.273)。2.3TypeⅢ型HINT1蛋白表达情况SGHIN及SGEC组、SGA组、SGLIN组与对照组蛋白表达率分别为16.7%(2/12)、50.0%(2/4)、35.7%(5/14)、73.3%(11/15)。SGHIN及SGEC组与SGLIN组比较，差异无统计学意义(P=0.391)；SGHIN及SGEC组与对照组比较，有显著差异(P=0.006)。SGLIN组与对照组比较，有显著差异(P=0.042)。将SGHIN及SGEC组和SGLIN组合并，合并组HINT1蛋白表达率较对照组显著降低(P=0.004)。3HINT1基因启动子区甲基化与蛋白表达的相关性分析3.1TypeⅠ型HINT1基因启动子区甲基化与蛋白表达的关系65例食管癌前病变及癌组织中HINT1基因启动子区甲基化阳性组HINT1蛋白表达率为5.0%(1/20)，HINT1基因启动子区甲基化阴性组HINT1蛋白表达率为62.2%(28/45)，两者比较有显著差异(P=0.000),HINT1基因启动子区甲基化与其蛋白表达之间呈现明显负相关(R=-0.438，P=0.000)。3.2TypeⅡ型HINT1基因启动子区甲基化与蛋白表达的关系71例贲门癌前病变及癌组织中HINT1基因启动子区甲基化阳性组HINT1蛋白表达率为17.1%(6/35)，HINT1基因启动子区甲基化阴性组HINT1蛋白表达率为55.6%(20/36)，两者比较有显著差异(P=0.001)，HINT1基因启动子区甲基化与其蛋白表达之间呈现明显负相关(R=-0.362，P=0.002)。3.3TypeⅢ型HINT1基因启动子区甲基化与蛋白表达的关系30例近端胃癌前病变及癌组织中HINT1基因启动子区甲基化阳性组HINT1蛋白表达率为14.3%(2/14)，HINT1基因启动子区甲基化阴性组HINT1蛋白表达率为43.8%(7/16)，两者比较差异无统计学意义(P=0.118)，HINT1基因启动子区甲基化与其蛋白表达之间无明显相关性(R=-0.321，P=0.084)。结论：1食管远端高级别上皮内瘤变及早期癌组织中HINT1基因启动子区CpG岛甲基化率显著升高，蛋白表达率显著降低；吸烟饮酒可以显著增加食管远端组织(TypeⅠ型)中HINT1基因启动子区CpG岛甲基化发生率，是食管远端组织HINT1基因甲基化的危险因素；2HINT1基因启动子区CpG岛甲基化可能是贲门部肿瘤(TypeⅡ型)发生的早期事件，HINT1甲基化阳性的贲门低级别上皮内瘤变患者应该加强临床随访；3近端胃癌前病变及早期癌组织中HINT1基因启动子区CpG岛甲基化率显著升高，蛋白表达率显著降低；4食管胃结合部Siewert三型癌前病变及早期癌HINT1甲基化率均较正常组显著增高，提示三者可能存在相似的分子学机制；5食管远端(TypeⅠ型)和贲门(TypeⅡ型)病变及癌组织HINT1基因启动子区CpG岛甲基化与其蛋白表达关系存在明显的负相关，HINT1基因启动子区CpG岛甲基化是食管远端和贲门组织HINT1蛋白表达下降的原因之一。