益气活血中药对脑出血大鼠脑组织Angiopoietin-1及其受体Tie-2蛋白表达的影响

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背景和目的:脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)具有高病死率、高致残率等特点,严重危害人类的生命和健康。其发病率只占所有类型脑血管病的30%,但其以50%以上的死亡率高居首位,40%的存活者留有严重残疾,给患者、家庭和社会带来沉重负担,是临床的危急重症。在祖国传统医学里,它属于“中风”范畴,由风、火、痰、虚、瘀等因素引起,清代著名医家王清任提出气虚致瘀的观点,创立益气活血名方补阳还五汤治疗中风,自此益气活血法在脑出血临床治疗中得到广泛应用并且疗效肯定。现代基础研究认为,益气活血中药具有改善脑出血血肿区脑血流量及能量代谢、改善脑组织微循环,能抑制相关的炎症反应,改善血液流变学指标及促进血肿吸收和损伤愈合等作用。脑出血后血肿本身及其缺血、缺氧引起的微循环继发性损害形成了脑出血后重要的病理改变。研究证实,脑出血血肿区(血肿内部及周边区)的微循环系统破坏,局部脑血流量(regional cerebral blood flow,RCBF)的下降,是导致临床症状恶化、影响脑血肿吸收消散的重要原因。因此,通过促进血管新生重新建立血肿区的微血管,改善血肿区微循环进而恢复血肿区的血液灌注,可为神经组织修复和神经功能恢复奠定基础。目前已发现的促进血管新生的因子主要包括内皮细胞特异性的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)家族、促血管生成素(angiopoietin,Ang)家族和多效性血管因子(pleiotropic angiogenicfactors,PAF)等。其中促血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)通过与其受体—含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶-2(tyrosine kinase that contains immunoglobulin-like loops andepidermal growth factor-similar-domains-2,Tie-2)结合,诱导其磷酸化,促进血管重塑、稳定和成熟并维持成熟血管的完整性及静息状态,并在血管生成过程中发挥促进出芽及分支的作用。Ang/Tie-2系统协同VEGF/VEGFR系统共同调节微血管的新生,并最终形成成熟的血管结构,促进损伤区微血管系统重建和血肿区微循环条件的改善,恢复对血肿区脑组织的供血供氧,加快血肿的吸收,进而促进神经组织结构和功能的恢复。本实验拟用益气活血治法经典方剂补阳还五汤及其益气、活血组分分别对实验性脑出血大鼠进行干预,用蛋白质免疫印迹技术(western bloting)观察益气活血中药对出血后脑组织中Ang-1及其受体Tie-2蛋白表达的影响,初步探讨益气活血中药在脑出血后血肿区微血管系统重建等病理过程中的作用机制,为益气活血中药在脑出血中的治疗提供理论依据。方法:155只SD大鼠随机分成6组:正常对照组,假手术组,模型组,益气组,活血组,益气活血组。立体定位向脑内右侧苍白球(前囟后1.40mm,矢状缝右3.20mm,深5.60mm)注入Ⅶ型胶原酶诱导脑出血大鼠模型。益气组、活血组和益气活血组相应灌服补阳还五汤拆方的益气方、补阳还五汤拆方的活血方和补阳还五汤全方。正常对照组大鼠于1d,其他各组分别于造模术后并灌胃的1d、4d、7d、14d、21d和28d六个时间点随机抽取5只大鼠。深麻醉后,断头法处死大鼠,迅速剥离颅骨,并分离鼠脑取得血肿区脑组织,运用蛋白质免疫印迹技术(western blotting)检测正常组及其它各组各时间点Ang-1和Tie-2受体蛋白的表达,结果进行光密度扫描半定量分析。结果:1.各组各时间点Ang-1蛋白的表达:正常组及假手术组不同时间点Ang-1表达未见明显阳性信号;模型组、益气组、活血组及益气活血组脑出血后1d即有Ang-1表达,模型组至21d达到高峰,随后开始下降,益气组、活血组及益气活血组表达高峰时间提前至14d,活血组及益气活血组至21d仍维持一定的表达水平;各个时间点益气活血组表达均高于其他组。2.各组各时间点Tie-2受体蛋白的表达:正常组、假手术组各时间点Tie-2的表达未见明显阳性信号;模型组、益气组、活血组及益气活血组脑出血后1d即有Tie-2表达,模型组在21d达到高峰,随后下降,益气组、活血组及益气活血组表达高峰时间提前至14d,益气活血组各个时间点表达均高于同时间点其他组。结论:益气活血中药能促使脑出血血肿周围脑组织Ang-1及其受体Tie-2蛋白的表达增强,而促进脑出血损伤区血管新生和成熟的作用,并促进脑出血大鼠结构和神经功能的恢复。
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