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根据已发表的网状内皮组织增生病病毒(REV)的长末端重复序列(LTR),人工合成一对能特异地扩增REV LTR序列的引物。分别从山东、江苏、上海等地的大型鸡场中,收集疑为REV感染的鸡的脾脏和肝脏,提取组织DNA,并以此为模板,通过聚合酶链式反应(PCR),从来自山东泰安、江苏海安、如皋以及上海等地的鸡场采集的样品中,分别从REV的前病毒cDNA中扩增到了REV的LTR序列。所收集的56份样品中,有21份样品呈PCR阳性。将不同地区REV LTR的PCR产物,克隆进TA载体进行序列测定,结果表明,该基因的保守性大于93%,而且上海某鸡场和如皋某鸡场分离株的LTR序列完全相同。 用本实验室标记的REV前病毒基因组探针进行斑点杂交(dot-hybridization)试验,对不同地区的样品进行验证分析,结果在56份样品中,有20份斑点杂交阳性,除第31#样品外,其中有19份PCR阳性。 将PCR和dot-hybridization的阳性样品碾磨、离心,上清经过滤后,接种96孔板鸡胚成纤维细胞(CEF)单层分离病毒,七天后,用针对REV的单克隆抗体(11B118株)进行间接免疫荧光试验(IFA)检测。结果发现:56份样品中,有15份IFA阳性,且所有IFA阳性样品,PCR和Dot-blot检测都呈阳性。 本研究表明,由于REV病毒自身的特点,在以REV前病毒cDNA为探针进行斑点杂交检测时,阳性检测率可能低于实际感染率。IFA作为检测方法因需培养细胞,时间长。REV的LTR序列比较保守,可作为该病毒特征性的保守区进行PCR检测和斑点杂交检测。本实验所收集的样品,来于相距较远的不同地区,因而,实验同时证实了REV在我国的广泛流行。