银屑病经典方剂含药血清对白介素22诱导HaCaT细胞增殖的影响

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银屑病(psoriasis)是一种常见的慢性、炎症性、反复发作性皮肤病,世界发病率为2%-3%。本病的典型表现为皮肤红斑及鳞屑,好发于青壮年,给患者的身心健康带来严重不良影响。本病发病机制不明确,西药治疗的安全性和长期疗效不理想,而中医治疗银屑病疗效显著,并且具有毒副作用小、复发率低等优势,日益受到广大患者的欢迎和医学界的重视。国内有关中医治疗银屑病临床研究的文献报道非常丰富,然而针对公认经典方、基础方的现代医学机制的文献报道比较匮乏。本论文从白细胞介素-22(IL-22)和银屑病经典方剂为出发点,探索银屑病的发病的免疫机制和经典方剂治疗银屑病的作用机理,主要包括文献综述和实验研究两郭分。文献综述共两篇。第一篇为IL-22与银屑病关系的研究进展,对IL-22的结构、信号通路、参与银屑病发病的证据及其发病机理、在临床中的应用前景做了总结;第二.篇为中药血清药理学方法研究进展,综述了中药药理血清的制备、在中医药上的应用以及存在的优势和不足。目的探讨IL-22能否促进角质形成细胞(keratinocyte, KC)增殖及相关的分子机制,阐明IL-22在银屑病发病中的作用机制;观察经典方剂犀角地黄汤、桃红四物汤、当归饮子含药血清对IL-22诱导的HaCaT细胞(人永生化角质形成细胞)增殖的影响,探索经典方剂治疗银屑病的作用机制和作用靶点,为经典方剂治疗银屑病提供理论依据。方法1制备动物药理血清,设犀角地黄汤组、桃红四物汤组、当归饮子组、甲氨喋呤(MTX)阳性对照组及蒸馏水空白对照组5组。2体外培养HaCaT细胞,分别加入不同浓度的IL-22,四唑盐比色实验(MTT)筛选IL-22刺激HaCaT细胞增殖的有效浓度。3加入有效浓度的IL-22,在不同时间点收集细胞,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测IL-22诱导HaCaT(?)田胞所激活的分子通路。4加入有效浓度的IL-22和5种不同的药理血清,MTT法测定银屑病经典方剂含药血清对IL-22诱导HaCaT细胞的影响。结果112.5-200ng/ml的IL-22均能刺激HaCaT细胞增殖。与阴性对照组相比,12.5ng/mL、25ng/mL组对HaCaT细胞增殖无统计学差异(P>0.05),其余各组对HaCaT细胞增殖均有统计学差异(P<0.05)。当IL-22浓度低于150ng/mL时,其促HaCaT细胞增殖作用与浓度正相关;当IL-22浓度高于150ng/mL时,其促HaCaT细胞增殖作用减弱。2有效浓度50ng/mL的IL-22处理HaCaT细胞30min至120min,均出现了]AK1和STAT3通路蛋白磷酸化,加入IL-2230min通道开放,60min时开放最大,120min出现衰减。3犀角地黄汤、桃红四物汤、当归饮子组药理血清均可抑制IL-22诱导的HaCaT细胞模型的增殖。药理血清的抑制作用随血清浓度增大而增强,呈明显正相关;药理血清的抑制作用随时间变化而不同,其中48h处的抑制作用最强;在同一时间和血清浓度下,不同药物含药血清抑制细胞模型的作用强度不一,抑制作用由强到弱依次为:犀角地黄汤组>桃红四物汤组>MTX组>当归饮子组,3个中药组与MTX组比较无统计学差异(P>0.05)。结论1IL-22能够以剂量依赖的方式促进HaCaT细胞的增殖,并且其调控机制是通过激活JAKl/STAT3分子通路实现,用IL-22模拟银屑病的表皮状态而且模型具有稳定性。2犀角地黄汤、桃红四物汤、当归饮子均可抑制IL-22诱导的HaCaT细胞模型的增殖,从抑制KC增殖的角度为经典方剂治疗银屑病提供理论依据,提示了“辨血为主,从血论治”在银屑病诊疗中的合理性。
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