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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的病毒性传染病。该病以妊娠母猪发热、厌食、早产、流产、死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍,新生及断奶前仔猪高死亡率以及各年龄段尤其是仔猪的呼吸道疾病为特征。1987年该病第一次在美国被发现,1991年在荷兰分离到该病毒,1996年中国成功分离到了第一株PRRSV CH-1a株。目前该病流行于世界各养猪国家,给世界养猪业造成了巨大的经济损失,是威胁当前养猪业最重要的传染病之一。目前检测PRRSV抗体的方法有很多,在临床上主要是用ELISA的方法检测,其中以N蛋白和GP5蛋白包被居多,在临床上都有较高的符合率。本研究主要以纯化的重组N蛋白和人工合成的两个N蛋白抗原(P30和P32)表位做包被抗原,建立方法进行临床样本检测,并和商品化试剂盒(IDEXX和LSI)进行比较。主要研究内容如下：1.PRRSVORF7基因的克隆与表达通过实验室培养的PRRSV广东湛江株提取RNA做为模板,扩增ORF7基因,然后将扩增出来的基因克隆连接到表达载体pET32a上,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,经过诱导表达并纯化出重组的N蛋白,大小为33KDa,并对N蛋白进行Western blot分析,证实其可以被PRRSV阳性血清识别,具有抗原性。2.PRRSV间接ELISA检测方法的建立及应用利用重组的N蛋白和人工合成的P30,P32等3个抗原,通过方阵滴定法确定最佳包被浓度和血清稀释倍数,并优化其相关的反应条件,建立了3种抗原的间接ELISA检测方法,并与商品化试剂盒(IDEXX和LSI)进行比较。通过已建立的重组N蛋白,P30, P32ELISA方法检测免疫猪群血清样本,与IDEXX商品化试剂盒比较的临床符合率分别为91.5%,88.3%,92.3%；与LSI商品化试剂盒比较的临床符合率分别为88.9%,77.1%,92%；同时通过本研究建立的3种方法检测感染猪群血清样本,与IDEXX商品化试剂盒比较的临床符合率分别为98.3%,95%,98.3%；与LSI商品化试剂盒比较的临床符合率分别为96.7%,90%,98.3%。以上结果可以看出3种ELISA检测方法的临床符合率都较高,其中P32为抗原的ELISA检测方法最好。