【摘 要】
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目的:观察Wnt5a对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激的小鼠巨噬细胞瘤细胞Raw264.7自噬的影响,并初步探讨Wnt5a对Raw264.7细胞自噬的调控机制。方法:用不同浓度ox-LDL处理不同时
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目的:观察Wnt5a对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激的小鼠巨噬细胞瘤细胞Raw264.7自噬的影响,并初步探讨Wnt5a对Raw264.7细胞自噬的调控机制。方法:用不同浓度ox-LDL处理不同时间诱导Raw264.7细胞产生自噬,western bloting检测自噬标志蛋白LC3BI/II与p62,选定后续处理时间和浓度。并检测可能的自噬相关通路m TOR、Wnt5a、PKCδ、STAT3的表达。采用si RNA瞬时敲低Wnt5a和PKCδ抑制剂Rottlerin处理,观察细胞对ox-LDL诱导自噬效应的变化。结果:时效和量效实验表明ox-LDL浓度60μg/ml处理Raw264.7细胞6h可使其自噬标志物总LC3B达到极大值,以60μg/mlox-LDL处理不同时间则总LC3B分别6h和在24h达到极大值,选ox-LDL浓度6h,60μg/ml作后续处理条件。其中60μg/ml ox-LDL处理Raw264.7细胞6h,则Wnt5a、PCKδ与STAT3表达增加。采用si-RNA干扰Wnt5a,则在60μg/ml ox-LDL组与无ox-LDL组均出现总LC3B、p62及PKCδ减少。表明Wnt5a可能是一个重要的自噬启动信号分子。加入PKCδ抑制剂Rottlerin,则与干扰Wnt5a类似的LC3BII、p62和STAT3减少。结论:Wnt5a通路介导了Raw264.7细胞对ox-LDL刺激所产生的自噬反应,且可能依赖PKCδ和STAT3的参与。
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