论文部分内容阅读
目的：将已经构建的重症肌无力抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体637(ScFv)与人血清白蛋白(HSA)重组基因(ScFv-HSA)进行诱导表达，确定融合蛋白的分子量，检测融合蛋白与人肋间肌乙酰胆碱受体的亲和性。方法：将携带有重组基因表达载体的毕赤酵母菌GS115菌株复苏后，利用抗生素G-418筛选高拷贝重组子，用YPD培养基传代培养，再经BMGY、BMMY表达培养基培养3天，每24小时添加100％甲醇使甲醇终浓度为1％诱导表达。培养基上清液室温经14000g离心后，利用斑点杂交试验(dot blot)初步判定上清液中的融合蛋白；采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析融合蛋白的分子量；应用间接免疫荧光技术确定融合蛋白与人肋间肌乙酰胆碱受体的亲和性。结果：培养基上清液中有融合蛋白的表达，分子量约为97.4 KD，间接免疫荧光试验显示在人肋间肌细胞间有荧光出现。结论：已经从真核细胞表达载体成功表达出融合蛋白，并且此融合蛋白可以与人肋间肌乙酰胆碱受体结合。