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端粒位于真核细胞线性染色体末端，是末端DNA和蛋白质的复合体，人类端粒重复序列为5′—(CCCTAA)_n—3′。端粒是非结构基因，虽然不具有编码蛋白质的功能，却发挥着一些重要的功能。端粒能防止染色体DNA降解、末端融合、非正常重组、缺失，从而维持染色体的稳定，端粒还可能与基因表达有关。研究发现，人正常体细胞随着分裂次数的增多，端粒逐渐缩短，但缩短到一定程度，染色体结构被破坏，细胞进入衰老期并以死亡告终。故端粒缩短被认为是“细胞分裂定时钟”(mitotic clock)。 端粒长短和稳定性决定了细胞寿命，并与细胞衰老和癌变密切相关。随着肿瘤学在分子水平研究的深入，对端粒的研究越来越受到重视。已往对端粒酶活性与恶性肿瘤的关系研究较多，而对于端粒长度与恶性肿瘤临床病理参数的关系至今缺乏共识。本研究主要采用DNA Southern杂交技术分析胃癌、癌旁和正常组织端粒长度的变化，并探讨胃癌组织端粒长度变化与临床病理参数的相关性。 材料和方法 1．32例新鲜胃癌手术标本，含相应的癌组织、癌旁组织和正常组织。组织标本中加入DNA裂解液，经蛋白酶K消化，酚—氯仿法抽提DNA。用分光光度法测定DNA浓度和纯度。 2．用限制性内切酶Hinf Ⅰ消化基因组DNA。 3．采用地高辛随机引物法标记裸DNA探针，应用DNA斑点杂交法检测探针的灵敏度和最适工作浓度。 4．酶切后的基因组DNA用λ-HindⅢ digest DNA作为分子量标记，郑州大学2004届研究生毕业论文胃癌、癌旁和正常组织端粒长度的变化在0.6%的琼脂糖凝胶中电泳分离;电泳后的琼脂糖凝胶经变性、中和等处理后将DNA用Southern转印法转移到尼龙膜上;高温烤膜固定DNA固定后的尼龙膜与标记后的探针在杂交袋中共孵育杂交。42℃预杂交、5.杂交后的尼龙膜洗膜后，用BCIP/NBT显色并对杂交弥散带进行光密度扫描分析，取扫描主峰位置与分子量标记比较后，计算得出平均末端限制片段(TRFs)，作为平均端粒长度。6.统计学处理:应用SPSS10.O统计软件进行统计学处理。组织DNA平均端粒长度用均数士标准差(又七)表示，采用了检验、t检验、K一孑检验和直线回归分析。检验标准以尸<0.05为差异有显著性，p<0.01差异有高度显著性。结果1.基因组DNA酶切完全，琼脂糖凝胶电泳呈“火箭筒”样均匀分布。2.地高辛随机标记法标记的探针灵敏度达IPg川一‘，特异性高，符合实验要求;25 ng ml一’的探针浓度是最合适的探针杂交浓度。3.正常胃粘膜组织的平均端粒长度有随年龄增大而逐渐缩短的趋势 (尸<0.05)，而癌旁和胃癌组织平均端粒长度跟供体年龄无显著相关性(P> .05)。4.32例胃癌组织的平均TRF长度为5.088士1.712kb，癌旁组织的平均TRF长度为5 .969士1 .659kb，正常组织的平均TRF长度为6.728士1.707kb。三组间两两比较存在显著统计学差异(尸=0.01)。实验中还发现有三例标本胃癌组织端粒长度比相应正常组织缩短不明显甚至稍有延长。5.胃癌组织的平均端粒长度跟肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移等病理参数间缺乏显著相关性(P>0.05)。结论.正常胃勃膜组织端粒长度与供体年龄呈负相关。.按正常胃勃膜一癌旁一胃癌的顺序端粒长度明显缩短。郑州大学2004届研究生毕业论文胃癌、癌旁和正常组织端粒长度的变化3.胃癌端粒长度缩短与临床病理指标无显著相关性。