猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种高度传染性的腹泻病毒。本研究主要是将本实验室分离的PEDV MS,SH变异毒株在Vero细胞上传代,通过比较细胞病变,测定其TCID50和生长曲线并对其S、N基因序列进行分析,研究PEDV细胞培养的遗传稳定性;原核表达CTB和eltB蛋白,通过与灭活病毒共同免疫小鼠,比较重组CTB和eltB蛋白对灭活PEDV的免疫增强效力,为PEDV疫苗的研发奠定基础,具体研究内容如下:1.猪流行性腹泻病毒细胞培养遗传稳定性为了研究本实验室分离的PEDV MS,SH毒株在Vero细胞上的遗传稳定性,将病毒在Vero细胞上传代,观察传代过程中细胞病变,测定其TCID50和生长曲线,并对S、N基因进行序列分析。将SH毒株从纯化后的F1传到F17,MS毒株从F20传到F71,对比发现PEDV MS,SH毒株可以在Vero细胞迅速增殖,随着代数的增加,TCID50逐渐增加,增殖速度变快。S,N基因序列对比发现SH毒株在传到F17时,S和N基因没有发生改变;MS毒株在传到F60时,S基因发生了 36个碱基的突变,10个氨基酸的改变,N基因未发生突变。2.重组不耐热肠毒素B亚单位蛋白与霍乱毒素B亚单位对灭活PEDV免疫增强效力的研究采用原核表达的方法制备CTB和eltB重组蛋白,与灭活的PEDV SH毒株配制成灭活疫苗,皮下免疫BABL/c小鼠,每次免疫2周后,分离血清和收集肠黏膜冲洗液,分别通过ELISA方法检测IgG、IL-4、INF-γ和IgA表达水平,实验结果表明CTB和eltB能显著增强体液免疫和细胞免疫效果,但黏膜免疫增强效果并不理想。本研究将PEDV MS,SH毒株在Vero细胞传代,研究其在细胞中的稳定性,实验结果表明随着病毒在细胞上传代,其病毒滴度,增殖速度和S基因突变率逐渐增加;同时原核表达eltB和CTB蛋白,与灭活PEDV免疫小鼠,本研究为PEDV灭活疫苗研究奠定基础。