【摘 要】
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本论文以内蒙古农业大学微生物实验室保存的Pediococcus acidilactici R-4(从日本处理有机废弃物中分离筛选)为研究对象,采用牛津杯法对Pediococcus acidilactici R-4培养液
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本论文以内蒙古农业大学微生物实验室保存的Pediococcus acidilactici R-4(从日本处理有机废弃物中分离筛选)为研究对象,采用牛津杯法对Pediococcus acidilactici R-4培养液进行酸性产物及H2O2产物排除试验、蛋白酶水解试验、酸碱稳定性试验等认为该菌产生的抗菌物质可能为细菌素。为进一步探索Pediococcus acidilactici R-4的抑菌机理,从分子水平检测其片球菌素操纵子,本试验以提取的Pediococcus acidilactici R-4全基因组为模板,根据GenBank(M83924)发布的pediocin PA-1基因中PedA结构序列设计合成一对特异性引物,利用PCR技术从基因组DNA中扩增出目的片段,经回收纯化后将目的片段连接于pMD19-T载体上,并转化到E.coli DH5α感受态中。经验证筛选,对阳性克隆进行鉴定分析,克隆到pET-32a(+)表达载体转入E.coli BL21(DE3)感受态中,经过Amp+平皿筛选,质粒双酶切鉴定和菌落PCR两步验证,成功获得重组阳性质粒,利用IPTG诱导表达感受态E.coli BL21(DE3),经过SDS-PAGE电泳,显示在26kDa左右出现条带,与预期的细菌素分子量大小符合。
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