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获得性免疫缺陷综合症（Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS）即艾滋病，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）感染引起的一种恶性传染病，它具有临床症状各异的复杂性免疫抑制，包括人体 CD4+T细胞数量进行性减少，细胞免疫功能损害，最后导致各种机会性感染、特殊的恶性肿瘤发生和中枢神经病变等。联合国艾滋病规划署发表的《2008年全球艾滋病疫情报告》中指出，至今全球共有3320万名艾滋病病毒感染者。在中国，截至2008年9月底，全国累计报告艾滋病病毒感染者26万多例，其中艾滋病病人7.7万余例，死亡3.4万余例。其状况非常令人担忧。因此，研制具有良好免疫保护作用的预防性和治疗性疫苗接种健康人群和感染者具有重要的现实意义。 本研究选用了目前研究最深入、最成熟的胸腺素α1(thymosinαl，Tα1)、协同刺激分子4-1BBL和OX40L的融合基因作为分子内佐剂连入由本室通过多年研究构建出的HIV多表位重组核酸候选疫苗上，构建出含分子内佐剂的HIV多表位候选疫苗pVAXI-MEGNp24-T和pVAXI-MEGNp24-4-1BBL-OX40L，以期来增强该疫苗的细胞免疫原性。将重组质粒转染BHK-21细胞，通过RT-PCR及间接免疫荧光进行分析。结果表明，外源基因Tαl及双协同刺激分子4-1BBL-OX40L在BHK-21细胞中均获得了正确的表达。 本研究将已构建好的重组DNA疫苗（pVAX1-MEGNp24-4-1BBL-OX40L）转化大肠杆菌Jm109，先制备LB种子液，然后转入复合培养基，经发酵罐建立该重组DNA疫苗的发酵工艺。以中空纤维交叉流系统收集菌体，碱裂解方法处理后得到质粒DNA的粗制品，通过分子筛层析（Sepharose6 FF）去除RNA，亲和层析（PlasmidSelect Xtra）去除线性质粒 DNA，阴离子交换层析（SOURCE30Q）精纯质粒DNA，最后用中空纤维交叉流系统进行浓缩至药用剂量。结果，每1L发酵菌中可得到32.3mg的质粒，整个工艺的回收率为61.3％，经质量鉴定，通过该套纯化工艺后所得的质粒DNA溶液，外观澄清透明，无絮状颗粒；pH值为7.2±0.2；超螺旋质粒比例为91.2%；纯度（OD260/280）为1.80；未检测到宿主蛋白质、宿主基因组、RNA；内毒素含量小于0.01EU/μg；抗生素检测结果和无菌实验结果为阴性；热稳定性良好，可以耐受一定范围的高温。各项指标均符合药用质粒DNA的质量标准，表明用该工艺纯化质粒DNA是可行的，从而为HIV重组DNA疫苗的临床前实验免疫研究及规模化生产奠定了基础。